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实验设计: Fe营养NMT实验设计手册
内容： 一、材料：大白菜二、基因型/品种：转基因、WT三、检测部位：根分生区（H+）、根成熟区（Cd2+）四、检测指标：H+、Cd2+五、处理：1) CK 2) 200mM NaCl处理 2d六、具体方案：1. H+、Cd2+200mM NaCl处理2d后，定点检测10分钟，8重复/组【参考视频】1.如何利用非损伤微测系统（NMT）进行Fe2+营养研究？（检测Cd2+的原因）https://tv.sohu.com/v/dXMvMjQ0NTI0MjEyLzk2MDUxMzEwLnNodG1s.html有研究发现Fe2+、Zn2+的转运用的都是同一个转运蛋白，该蛋白同时还能转运Cd2+，因为无法直接测Fe2+，那么检测Cd2+流速，如果是吸收的，间接证明了Fe2+也是吸收的，再结合ICP-MS等类似实验，检测植物体内的离子含量，也可以验证Fe2+的吸收。2.如何通过检测H+流研究植物Fe营养？（检测H+的原因）https://v.qq.com/x/page/p0521l0uc4t.html缺铁的情况下，植物为了吸收更多的铁（土壤里的铁都是三价的），会诱导一些ATP酶，把ATP酶放在质膜上诱导生成更多的H+，然后根系泌H+，土壤酸化，三价铁再高铁还原酶的作用下被还原成二价铁，再被吸收。【参考文献】C2014-013标题：Over-expression of the MxIRT1 gene increases iron and zinc content in rice seeds ...
非损伤微测技术(NMT)介绍: 什么是非损伤微测技术？
内容： 非损伤微测技术（Non-invasive Micro-test Technology：NMT）是一种超高灵敏度，非接触、流速为单位，检测材料外部离子分子浓度及其梯度的技术。 ...
非损伤微测技术(NMT)介绍: 非损伤微测技术的材料科学应用
内容： 离子分子不仅是构成材料的基本元素，同时也是它们与外界环境进行物质及信息交换的重要载体。这种交换过程会在材料表面形成离子分子浓度梯度，非损伤微测技术就是通过检测这些离子分子浓度梯度，揭示金属材料的腐蚀机制，以及生物材料的生物兼容性机理。 ...
非损伤微测技术(NMT)介绍: 非损伤微测技术的民生应用
内容： 随着NMT技术在生命科学和材料科学中的应用持续深入，各种离子分子所参与的功能和机制不断被阐明，相关的民生应用开始加速涌现。比如：医疗精准用药、空气/水微生物（含新冠病毒）污染检测、高通量种子活力生理检测、老年痴呆快速评估、生殖组织细胞活性快速检测、个性化农作物经济施肥评估等等。 ...
非损伤微测技术(NMT)介绍: 非损伤微测技术的生命科学应用
内容： 离子和分子稳态是所有生命的共同基本特征之一，且是一种动态平衡。它不断微调以响应细胞器、细胞、组织、器官和整个生物体的内部和外部环境变化。该动态平衡是通过维持各类生物膜两侧的离子和分子浓度梯度来实现的。非损伤微测技术则通过检测这些跨膜运动离子分子形成的浓度梯度，揭示活体材料的离子分子稳态这一生命基本特征，及其相关的生理功能与机制。 ...
非损伤微测技术(NMT)介绍: 非损伤微测技术的起源
内容： 非损伤微测技术的诞生及其命名，是许越教授与匡廷云院士、杨福愉院士、林克椿教授等科学家一道，在美国科学家Lionel Jaffe的钙离子振荡电极技术（Vibrating Probe：VP，1974）原理基础上，以2005年创立的旭月（北京）科技有限公司为技术支持和商业后盾，经过分子离子种类扩增，测量精度的大幅提升，测量方式的模块化、⾃动化、专业化、智能化、标准化改进，以及3D立体数据采集及动画演示等新功能的成功研发而成。目前，非损伤微测技术已成为世界上同类型VP技术商业化产品，比如澳洲：MIFE，美国：SIET、SERIS等品牌中的一员，并于2021年通过科技部世界领先评审。 ...
设备操作: 文献资料
内容： 数据处理分析可见附件：数据分析处理流程(iFluxes_V1.0).pdf、数据分析处理流程(imFluxes_V2.0).pdf 非损伤微测技术文章撰写参考资料可见附件：非损伤微测技术文章撰写参考资料_V5.2——联盟版.pdf 文章撰写资料试剂耗材型号发表的文献可见附件：C2015-001-Overexpression_of_bacterial_c-glutamylcysteine_synthetase.pdf 流速传感器工作原理文献文献里介绍了Ca2+流速传感器结构、组成、LIX如何工作，流速如何测定等等基本问题可见附件： Construction,_Theory_and_Practical_Considerations_for_using_Self-Referencing_of_Ca2+-Selective_Microelectrodes_for_Monitoring_Extracellular_Ca2+_Gradients.pdf ‎ ...
设备操作: 流速传感器开口与型号
内容： 流速传感器开口（尖端直径）很重要，流速传感器的尖端直径决定了实验的空间分辨率及流速传感器的输入电阻，同时流速传感器尖端的形状很大程度上决定着吸附LIX的能力。目前，非损伤微测实验常用的流速传感器开口大小为1-2μm、4-5μm、8-10μm。流速传感器型号： XY-CGQ-01（组织样品专用4-5 μm） XY-CGQ-02（细胞样品专用1-2 μm） XY-CGQ01（组织样品专用8-10 μm） ...
设备操作: 参比电极的使用及注意事项
内容： 非损伤微测系统中的参比电极主要有两个作用：和流速传感器、测试液、前置放大器一起构成电路回路，提供一个参考电位。使用时要注意以下几点：灌充溶液时，要将塑料管连接部分从后端拧下来，从后端用流速传感器灌充液的那种细的注射头灌充溶液，参比内液不要灌充太多，浸没过氯化银丝部分1cm即可。新灌充3M KCl后，需要让氯化银丝在参比内液中浸泡24小时以上，这样电位稳定得快一些。灌充溶液时，注意保护好内部银丝尖端的氯化银部分，不要私自用砂纸磨或者剪断。每次使用完毕后，将参比电极浸泡在3MKCL溶液中（即收纳管内），不要暴露在空气中，如果长时间不使用，需要将塑料管中的溶液全部吸出，再用蒸馏水润洗几遍，晾干后保存。当测试过程中出现电位不正常时，可以首先更换传感器（或LIX），排除传感器问题后，最有可能是参比电极的问题，大概有以下几种情况：静态电位显示+-5.000V：检查参比电极接口是否插入前置放大器接口中，参比电极是否放入测试液中，参比电极中的溶液是否没过银丝尖端。校正值在正常范围内，但是比起经验值偏大或偏小（比如低于-150mV,高于500mV等），首先确定测试液和流速传感器灌充液浓度是否正确，之后检查参比电极中的灌充液浓度是否正常，可以重新配制后重新灌充；如果还不行的话，可以更换参比电极的塑料管，新的参比电极附带一个备用的。当电位变化很快时，除了流速传感器的电位漂移外，还有可能是参比电极漏液造成的，可以更换塑料管试试。参比电极位置应尽量远离样品；最好深入液面5mm；测试时尽量将参比电极相对与样品的位置固定。 ...
实验设计: 样品准备
内容： ● 由于非损伤微测系统十分灵敏，所以为了文章的成功发表，NMT实验材料的准备工作需要更加严谨。 1. 常见的培养方式有以下几种：水培（液体培养基）、平板培养（固体/半固体培养基）、土/沙培。由于非损伤微测系统在测定时需要将样品维持在液体环境中，因此水培样品最易操作。可检测的样品部位中，根部的检测经常会涉及到组培苗或是土/沙培苗。如果待测样品无法进行水培，可尝试土/沙培后再进行水培发根。这样培养的样品根部完整，避免影响测试点的选取。并且表面附着的物质也可以通过测试液平衡过程进行去除。从而保证了测试数据的稳定性和准确性。但如果只能在测试前将样品从土壤中或平板上取出，提醒您在取样时一定要小心，以免由于操作失误致使样品受到损伤，从而无法获得真实可靠的实验结果。并建议您取样时多冲洗待测样品根部并适当增加样品的平衡时间。 2. 用于非损伤微测系统检测的样品，绝大多数不需任何额外处理。但为了提升实验成功率，以下事项需要您的重视。本篇以苗期样品为例：（1）样品苗龄：请参考NMT文献确定检测使用的样品苗龄。 a. 需要注意检测不同的部位（根、叶片），样品的苗龄可能不一样； b. 不同的实验目的（胁迫处理、营养吸收），样品的苗龄可能不一样。（2）处理因素： a. 如果处理时间较长，按照正常程序处理上即可； b. 如果处理时间较短（数小时甚至更短），可以将样品寄送至美国扬格（旭月北京）非损伤测试中心再由工程师行处理。（3）样品状态：活体样品信号非常灵敏，前期的样品准备很重要！不论是培养条件、环境，还是处理条件，都要把握的十分精确，只有这样，得出可用结果的概率才会高。（4）待测样品挑选：待测样品需保证形态比较一致，才会更好地保证实验数据的一致性。因此建议样品数量准备充裕，并挑选一致性较强的样品进行测定。 3. 液泡提取方法（1）液泡提取方法-烟草叶片可见附件（2）液泡提取方法-杨树根 ...
实验设计: 测试液成分如何确定？
内容： 测试液成分： 1.参考NISC测试液标准 v2.5 (可见附件) 2.根据样品或是研究方向、待测指标等借鉴文献中使用的溶液成分。NISC文献库 3.自行设计。需要强调的是，无论您选择什么样的溶液成分，需要保证非损伤微测系统在此溶液环境下可以正常工作。所以只需在正式检测前，进行一个简单的预实验操作——查看此溶液对系统是否会产生影响，即可！使用旭月公司设计的溶液配制小工具可以保证配制溶液的准确性！为了提高实验效率以及得到更好的实验结果，可以选择采购旭月公司提供的溶液。溶液配制视频教程: ...
设备操作: 非损伤微测系统用户手册V5.5-中文（适用于流速检测软件imFluxes V2.X）
内容： ...
设备操作: 非损伤微测系统操作规程
内容： ...
数据分析: 数据处理方法
内容： 数据处理及分析教程 1. NMT数据处理分析教程【非损伤微测软件V1.0 (imFluxes V1.0)】提取码：m688 2. NMT数据处理分析教程【非损伤离子分子流速检测软件V2.0 (imFluxes V2.0)】提取码：5m76 如何选择imFluxes V1.0还是imFluxes V2.0？ 3. NMT流速换算表及教程 4. 数据分析软件【SPSS】提取码：dpil ...
数据分析: 流速数据正负值的含义
内容： 1. 流速数据正负值的含义 1）如果是美国扬格（旭月北京）测试中心提供给您的实验结果，或是使用自己购买的非损伤微测系统所得数据，正值一律表示外排（由内向外方向流动），负值表示吸收。 2）如果是看文献，则一定要根据文献上的标注进行判断。 ...
文章撰写: 文章撰写注意事项
内容： 1. 切勿照搬NMT文章方法学撰写参考资料中全部内容，请根据您测试的实际情况填写实验细节； 2. 如果是在美国扬格（旭月北京）非损伤测试中心完成NMT测试的，系统缩写为NMT，并非SIET等其余名称。 ...
文章撰写: 常见审稿问题
内容： 传感器选择效率：以Ca2+为例，如何确定Ca2+传感器检测到的为Ca2+信号，而非其它离子的信号？传感器对目标离子/分子的选择效率验证，是非损伤微测系统传感器商业化流程中的重要一步。研究人员会检测传感器对溶液中包括目标离子/分子在内的常见离子的选择效率，只有当传感器对目标离子/分子的选择效率达到95%以上时，才被认为符合科研需求。是否为真实信号——背景信号干扰程度流速信号的确有可能受到背景信号的干扰，从而产生非真实的信号。实验中，可采用传感器远离样品一定距离后所采集的信号，同样品信号进行对比，以确定检测结果是否受到背景信号的干扰。神经元Ca2+流速检测（F2011-005）如上图所示，在第150s时，将Ca2+传感器远离神经元200μm，此时测得的流速数据不受样品信号影响，即为背景值。如果背景值在0线上下小幅波动，表明背景信号弱，其对样品流速信号的影响有限，可认为此时的样品信号接近于真实信号。对于根、叶等样品，均可采用此法，以验证样品信号是否受背景信号的干扰。离子/分子流动方向、大小与以往文献不一致——N外排信号、IAA流速数量级 1. 为什么根部的NH4+、NO3-测不到吸收？ NMT作为活体检测技术，可反应样品的实时生理状态。而根部NH4+、NO3-的实时流动情况会受到诸多因素的影响，如前期培养、样品处理、取样方法、测试液成分、检测位点等等。NH4+、NO3-出现无法测到吸收并非异常情况，已发表的SCI文献中也多次报道（文献编号：C2013-008），可以根据课题需要对实验体系进行调整。不同基因型拟南芥根部成熟区的NO3-流速。正值为外排，负值为吸收下面分享几位老师对于此问题的经验及看法： 1）中国农业科学院水稻所某老师 a. 做NH4+、NO3-吸收动力学实验时（用测浓度技术），茶树苗一般会饥饿一周后进行检测。如果饥饿时间短，无法测到吸收也属正常情况。 b. NH4+较NO3-容易测到吸收，因为植物对NH4+浓度比较敏感，高NH4+浓度对植物有毒害作用，所以植物吸收NH4+后,会将其转化为其它物质，保持体内较低的NH4+浓度，而NO3-则无此机制，植物体内的NO3-浓度较NH4+高，不易测到吸收。 2）西北农林科技大学某老师 a. 样品使用幼苗，苗龄不宜太长，切忌为了多长一些根，以便扩大样品挑选空间而错过最佳检测时间； b. 扩大根部检测的范围，寻找吸收位点； c. 尽量避免长途运输，否则样品状态会受到较大影响。 3）海南大学某老师使用琼脂培养基培养的木薯，N饥饿一周，依然无法检测到NO3-吸收。虽然根毛稀少，但部分根毛可以检测到NO3-的吸收。 2. 为什么检测到的IAA流速值的数量级与国外文献中IAA的数量级差别较大？旭月公司研发的IAA传感器，是世界上第一款商业化IAA传感器。其检测数据已经在SCI期刊上发表了诸多成果（C2015-019，C2016-007），准确性已经得到了国际学术界的认可。因非损伤微测技术检测的是活体样品，受各类因素影响，信号变化幅度较大。不同的实验体系，检测结果相差较大，是较为普遍的现象。离体检测有影响——切根、撕叶片任何一个技术都无法做到绝对的“无损”，非损伤微测技术也不例外。为了符合非损伤微测技术的检测要求，有时需要采用切、剖等方式，将样品暴露出来。最常见的是将植物的根切下来后再进行检测。 1）诸多的研究成果已经侧面表明，对离体根进行检测，依然可以得到科学的结论。 2）有学者专门设计实验，对比离体前后，不同植物根部各个离子流速的差异。结果表明，将松树、豌豆、大豆等植物的地上部分切断，在之后的80分钟内，并没有导致其根部H+，NH4+，NO3-流速产生显著的变化（F2012-004）。在体花旗松根与离体花旗松根根部H+，NH4+，NO3-流速的对比样品检测时的测试液环境并非正常生长时的培养环境，这会对流速检测结果造成影响吗？样品检测时所处的溶液环境即测试液，其确定的原则是：既满足课题研究需求，又符合非损伤微测系统技术的要求。测试液成分的设计是开放性的，研究者可以根据自己的课题需求进行设计。在正式检测前，通过非损伤微测系统判断溶液成分是否会影响到传感器，从而导致流速结果的准确性受影响。假若符合技术要求，可直接使用此测试液上机检测；如果不符合技术要求，则需调整溶液的成分再判断是否符合技术要求。总之，测试液成分的确定过程，即是在科研需求与技术要求之间，寻找一个最佳的平衡点。作为研究者，对于“样品检测时的测试液环境并非正常生长时的培养环境，从而无法反映正常生理状态下的流速结果”这一问题，大可不必担心。从对现有的数百篇非损伤微测技术文献统计来看，测试液成分同培养液成分相同的情况，并不多见，但这依然不能阻止非损伤微测技术研究的发展。 ...
设备操作: 流速传感器（4～5um）和（8～10um）有和区别？
内容： 括号中的数字是传感器的开口大小。非损伤微传感器（4～5um）适用于测试组织样品的H+、Ca2+、K+、Na+、Mg2+、Cd2+、Cu2+和Pb2+的流速，非损伤微传感器（8～10um）适用于测试组织样品的NH4+、NO3-和Cl-离子的流速。 ...
文献电子报: Food Energy Secur农科院作物所：NMT发现E3泛素连接酶基因TaPUB15增强了水稻在盐胁迫下排钠保钾的能力
内容： 基本信息主题：NMT发现E3泛素连接酶基因TaPUB15增强了水稻在盐胁迫下排钠保钾的能力期刊：Food and Energy Security 影响因子：5.242 研究使用平台：NMT植物耐盐创新平台标题：TaPUB15, a U-Box E3 ubiquitin ligase gene from wheat, enhances salt tolerance in rice 作者：中国农业科学院作物研究所景蕊莲、毛新国、李巧茹检测离子/分子指标 Na+、K+ 检测样品 2周龄水稻幼苗（转基因、WT）根分生区（距根尖100 μm根表上的点）中文摘要（谷歌机翻）植物U-box（PUB）E3泛素连接酶在对环境胁迫和激素信号的响应中起着至关重要的作用，但在小麦（Triticum ...
文献电子报: PP：外生菌根提升植物耐盐能力的新机理 | NMT创新平台成果回顾
内容： 文章标题：Paxillus involutus Strains MAJ and NAU Mediate K/Na Homeostasis in Ectomycorrhizal Populus × canescens under Sodium Chloride Stress 土壤盐渍化限制了农林业的生产。接种外生菌根（EM）真菌能够提高盐渍环境中林木的生物量。EM增加矿质营养吸收，减少对Na+的吸收。Paxillus involutus菌株MAJ和NAU是高度耐盐的真菌，增加盐胁迫下K+的吸收。另外，EM增加共生期间根部的Ca2+，Ca2+调节盐胁迫下的K+/Na+平衡，但是植物如何通过EM增加Ca2+影响K+/Na+平衡的相互关系仍不清楚，即EM真菌如何帮助植物耐盐。 ...

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