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  • 实验设计: 盐胁迫Na+吸收实验体系标准
    内容: 一、材料:拟南芥 二、基因型:WT、转基因1、转基因2 三、处理:200mM NaCl处理 四、检测指标:Na+ 五、检测部位:根分生区(过渡区中间)   六、具体方案: Na+吸收(测Na+) 【目的:查看盐胁迫下,谁的Na+进入的少】 一般来说,耐盐材料在盐胁迫下,吸Na+速率更小。   1)对照组 置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组 2)盐胁迫组 a.置于200mM NaCl中处理0.5/1/2 h后,直接检测,记录10分钟,8重复/组   (例如:200mM NaCl处理半小时,测试液50mM NaCl,0.1mM CaCl2,pH6.0,不需要平衡,放入测试液中直接开始测) ...
  • 实验设计: 盐胁迫K+外排实验体系标准
    内容: 一、材料:拟南芥 二、基因型:WT、转基因1、转基因2 三、处理:200mM NaCl处理24h 四、检测指标:Na+,K+ 五、检测部位:根分生区(过渡区中间)   六、具体方案:   【目的:查看盐胁迫下,植物保K+能力,也就是哪种植物在盐胁迫下排出去的K+更少】 一般来说,耐盐材料,盐胁迫下排K+更少         1)对照组 置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组 2)盐胁迫组 a. 200mM NaCl胁迫后,立即检测(200mM NaCl实时处理) b.置于200mM NaCl中处理24h后,直接检测,记录10分钟,8重复/组(200mM NaCl预处理24h)   注意:测K+直接在胁迫浓度里测即可,例如测试液:200mM NaCl,0.1 mM KCl,0.1mM CaCl2,pH6.0 ...
  • 实验设计: 盐胁迫Na+外排实验体系标准
    内容: 一、   材料:拟南芥 二、   基因型:WT、转基因1、转基因2 三、   处理:200mM NaCl处理24h 四、   检测指标:Na+ 五、   检测部位:根伸长区   六、   具体方案: 【目的:查看盐胁迫下,两种植物排Na+能力的差异】   1)对照组 置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组 2)盐胁迫组 置于200mM NaCl中处理24h后,记录10分钟,8重复/组     测试液:0.5mM NaCl,0.1mM CaCl2,pH6.0 ...
  • 实验设计: 高铵胁迫NH4+外排实验体系标准
    内容: 一、   材料:拟南芥 二、   基因型:WT、转基因1、转基因2 三、   处理:10mM NH4Cl处理24h 四、   检测指标:NH4+ 五、   检测部位:根成熟区   六、   具体方案: 置于10mM NH4Cl中处理24h后,直接检测,记录10分钟,8重复/组   测试液:0.1mM NH4Cl,0.1 mM CaCl2,pH6.0   铵外排检测时的样品平衡时间需要尝试,比如平衡20min检测一下、平衡40min检测一下,看看平衡多久能检测到持续稳定的铵外排。   ...
  • 实验设计: 干旱实验体系标准
    内容: 一、 材料:拟南芥 二、 基因型:WT、OE 二、检测部位:保卫细胞 三、检测指标:Ca2+、K+、H+ 四、处理: 1. 对照 2. 自然干旱胁迫10天   五、具体方案 定点检测5分钟,8重复/组   测试液:2.0mM KCl+0.1mM CaCl2+5.0mM MES,pH6.0(可测K、Ca、H、Cl) 平衡时间:如果检测气孔打开的,照光(10000~20000lux)平衡1h ...
  • 实验设计: 植物免疫Ca2+流(测根)实验体系标准
    内容: 一、材料:拟南芥 二、品种:WT、mutant 三、检测部位:根内皮层细胞 四、检测指标:Ca2+ 五、处理 1 μM Flg22瞬时处理   六、具体方案: 1 μM Flg22瞬时处理前检测5分钟,1 μM Flg22瞬时处理后检测10min,8重复/组   测试液:0.1mM CaCl2, pH 6.0 平衡时间:4 h ...
  • 实验设计: 拟南芥根真菌滤液
    内容: 材料:拟南芥 处理: 纯化真菌滤液1 纯化真菌滤液2 纯化真菌滤液3 检测指标:H+ 检测部位:根分生区(过渡区中点) 具体方案: 纯化真菌滤液1、2、3处理拟南芥根24h后(处理时间可调整),定点检测10分钟 纯化真菌滤液1、2、3处理前检测5分钟,纯化真菌滤液1、2、3实时处理后检测10分钟 七、重复数:8 ...
  • 实验设计: 拟南芥根PEG
    内容: 材料:拟南芥 基因型:WT、OE1、OE2、RNAi 检测部位:根分生区(过渡区中点) 检测指标:Ca2+、Na+、K+、Cl- 处理: 150mM NaCl 145mM NaCl+5mM Na2CO3 10%PEG6000 具体方案: Ca2+预处理150mM NaCl、145 mM NaCl+5mM Na2CO3、10%PEG处理6h后(处理时间可调整),定点检测10分钟在,8重复/组 Ca2+实时处理150mM NaCl、145mM NaCl+5mM Na2CO3、10%PEG处理前检测5分钟,150mM NaCl、145mM NaCl+5mM Na2CO3、10%PEG处理10min后检测15-20分钟(经费允许可以持续检测30分钟),8重复/组 Na+吸收(测Na+)【目的:查看盐碱胁迫下,谁的Na+进入的少】一般来说,耐盐碱材料在盐胁迫下,吸Na+速率更小。1)对照组置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组2)胁迫组a.置于150mM NaCl、145 mM NaCl+5mM Na2CO3中处理0.5/1/2h后,直接检测,记录10分钟,8重复/组 Na+外排(测Na+)【目的:查看盐碱胁迫下,两种植物排Na+能力的差异】这里已经是更进一步地去发现耐盐碱材料的耐受机制,是不是根部排Na+能力更强1)对照组置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组2)胁迫组置于150mM NaCl、145 mM NaCl+5mM Na2CO3中处理6/12/24/48h后(时间点可以调整),记录10分钟,8重复/组 K+吸收/外排(测K+) 【目的:查看盐碱胁迫下,植物保K+能力,也就是哪种植物在盐碱胁迫下排出去的K+更少】 一般来说,耐盐碱材料,胁迫下排K+更少 1)对照组 置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组 2)胁迫组 150mM NaCl、145 mM NaCl+5mM ...
  • 实验设计: 拟南芥根NaHCO3处理
    内容: 实验1—Ca2+、H+、K+流速 检测样品:拟南芥 检测部位:根部伸长区—老师写的是成熟区(距离根冠1000 μm以上) 检测样品品种:WT、HA12#17、HA12#58、HA16#3、HA16#4、HA24#13、HA24#14 处理方式:无处理(对照)、7 mM 的NaHCO3处理24 h-48h(时间点不确定,暂定24和48h) 重复数:8 检测指标:Na+、H+、K+ 具体方案 对照组、7mM NaHCO3胁迫24h、48h后定点检测5 min 目的:观察NaHCO3长时处理效应,比较植物耐碱胁迫的能力 参考文献 https://mp.weixin.qq.com/s/jgVHMzXIJp8mEvsuT6Ny3w https://mp.weixin.qq.com/s/hoDMtVPbC0jxqVZnvs7kRA ...
  • 实验设计: 拟南芥保卫细胞瞬时ABA
    内容: 材料:拟南芥 基因型:WT、突变体 检测部位:保卫细胞 检测指标:Ca2+ 处理:10μM ABA实时处理 具体方案: WT:10μM ABA处理前检测5min,10μM ABA处理后检测20min(3个重复,用于确定信号变化比较大的时间段) 10μM ABA处理前检测5min,10μM ABA处理后检测10min(5个重复,假如根据上面的三个重复确定数据在加药后10min可以稳定,则之后的样品都检测10min) 突变体:10μM ABA处理前检测5min,10μM ABA处理后检测10min(8重复)   ...
  • 实验设计: 拟南芥根 叶酸+硝酸钾处理 NO3-
    内容: 方案一 材料:拟南芥 品种:WT、atdfb-3 处理: 9.4mM KNO3处理1d、3d、6d 9.4mM KNO3 +叶酸处理1d、3d、6d(仅处理atdfb-3突变体) 检测指标:NO3- 检测部位:根成熟区 具体方案: 处理1d、3d、6d后,检测10分钟稳定数据 七、重复数:6 方案二 材料:拟南芥 品种:WT、atdfb-3 处理: 9.4mM KNO3处理6d 9.4mM KNO3 +叶酸实时处理(仅处理atdfb-3突变体) 检测指标:NO3- 检测部位:根成熟区 具体方案: 9.4mM KNO3处理6d后,检测10分钟稳定数据,8重复/组 9.4mM KNO3 +叶酸实时处理前检测5分钟,9.4mM KNO3 +叶酸实时处理后持续检测20分钟(摸索最佳处理时间),4重复/组 测试液 9.4mM KNO3,0.1mM CaCl2,pH6.0 叶酸,9.4mM KNO3,0.1mM CaCl2,pH6.0 2021.9.9 材料:拟南芥 品种:WT、atdfb-3 处理: 9.4mM KNO3处理6d 9.4mM KNO3+50μM叶酸处理6d 检测指标:NO3- 检测部位:根成熟区 具体方案: 处理6d后,检测10分钟稳定数据 七、重复数:6 ...
  • 实验设计: 拟南芥根盐胁迫
    内容: 材料:拟南芥 基因型:转基因1、转基因2、转基因3、转基因4、突变体1 重复数:6 二、处理: NaCl处理24h 三、检测指标:Na+ 四、检测位点:根分生区(过渡区) 五、具体实验细节: NaCl处理24h后,定点检测5分钟稳定数据 【目的:查看盐胁迫下,不同植物根部排Na+能力差异】 ...
  • 实验设计: 拟南芥根盐胁迫
    内容: 周四早上: 先进行周五早上盐胁迫苗子的处理(需要NaCl胁迫24小时) 周五: 上午对前一天NaCl处理的苗子进行测试 实验1、基因A对盐胁迫介导的跨膜离子流动的影响,共12个样品 检测样品:拟南芥 检测部位:根 检测样品品种:A和B(*2) 检测指标:Na+外排 处理方式:正常培养5~6天后,100mM NaCl处理24h后,放入测试液。 检测位点:扫点:根毛区、分生区、伸长区(*3),优先测根毛区。 测定时间:对照组:检测3分钟(三个区域测同一棵苗,进行扫点)盐胁迫组:测5分钟(三个区域测同一棵苗,进行扫点) 重复数:3(*3) 处理液:NaCl(100mM),pH5.8测试液:NaCl(0.5mM),pH5.8   实验2、基因A对冷胁迫介导的跨膜离子流动的影响,共12个样品 检测样品:拟南芥 检测部位:根 检测样品品种:A和B(*2) 检测指标:Ca2+ 处理方式:正常培养后冷胁迫瞬时处理 检测位点:分生区、伸长区(*2),优先测分生区。 测定时间:处理前:检测3分钟4℃处理瞬时处理后:检测10分钟(处理前处理后测同一棵苗) 重复数:3(*3) 测试液:0.5 mM CaCl2,pH5.8低温测试液:0.5 mM CaCl2,pH5.8 ...
  • 实验设计: 拟南芥根Na、K盐胁迫
    内容: 材料:拟南芥 基因型:WT、转基因1、转基因2 处理:200mM NaCl处理24h 检测指标:Na+,K+ 检测部位:根分生区(过渡区中间) 具体方案: Na+吸收(测Na+)【目的:查看盐胁迫下,谁的Na+进入的少】一般来说,耐盐材料在盐胁迫下,吸Na+速率更小。1)对照组置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组2)盐胁迫组a.置于200mM NaCl中处理0.5/1/2 h后,直接检测,记录10分钟,8重复/组 Na+外排(测Na+)【目的:查看盐胁迫下,两种植物排Na+能力的差异】这里已经是更进一步地去发现耐盐材料的耐盐机制,是不是根部排Na+能力更强1)对照组置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组2)盐胁迫组置于200mM NaCl中处理24h后,记录10分钟,8重复/组 K+吸收/外排(测K+) 【目的:查看盐胁迫下,植物保K+能力,也就是哪种植物在盐胁迫下排出去的K+更少】 一般来说,耐盐材料,盐胁迫下排K+更少 1)对照组 置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组 2)盐胁迫组 200mM NaCl胁迫后,立即检测(200mM NaCl实时处理) b.置于200mM NaCl中处理24h后,直接检测,记录10分钟,8重复/组(200mM NaCl预处理24h) ...
  • 实验设计: 拟南芥根Ca TM和DMSO预处理 瞬时实验
    内容: 【实验一:实时处理】 材料:6日龄拟南芥 基因型:WT、突变体 三、检测指标:Ca2+ 四、检测位点:根分生区(过渡区) 五、重复:8 【具体方案】 对照组:5 mg/L DMSO 处理前检测5min,5 mg/L DMSO实时处理后检测10 min 处理组:5 mg/L TM处理前检测5min,5 mg/L TM实时处理后检测10 min 备注:对照组、处理组能否只检测一组药品处理前的样品 【实验二:预处理】 材料:6日龄拟南芥 基因型:WT、突变体 三、检测指标:Ca2+ 四、检测位点:根分生区(过渡区) 五、重复:8 【具体方案】 TM处理0h(对照)、3h、6h后定点检测5min ...
  • 实验设计: 拟南芥保卫细胞K、Cl免疫
    内容: 检测样品:拟南芥 检测部位:保卫细胞 检测样品品种:WT 检测指标: K+、Cl- 处理方式: flg22(100 nM)实时处理 ABA(10 uM)实时处理 flg22+SCREW实时处理 ABA+SCREW实时处理 检测位点:保卫细胞定点检测 测定时间:a、b、c、d组加药前检测3min,加药后检测10min(根据前两个样品数据的稳定情况决定后续样品的检测时间) 重复数:6 ...
  • 实验设计: 拟南芥保卫细胞ACC瞬时处理
    内容: 材料:拟南芥 基因型:野生型、突变体、过表达 处理:50μM ACC处理10min 检测指标:H2O2 检测位点:保卫细胞 重复:3 具体实验内容 50μM ACC处理前检测10min,50μM ACC处理10min后再检测10min ...
  • 实验设计: 拟南芥下表皮保卫细胞
    内容: 检测样品是:拟南芥;检测部位是:拟南芥下表皮保卫细胞 品种:fim1-1、fim1-2、fim2-2 检测指标:H2O2 处理方式:50 μM ABA处理时间为15min 检测位点: 定点测量拟南芥下表皮保卫细胞没有处理的样品检测10min,50 μM ABA处理15min后检测10min 重复数:3 测试液 处理前:2.0mM KCl, 0.1 mM CaCl2, 5.0 mM MES, pH 6.0; 处理后:50 μM ABA, 2.0mM KCl, 0.1 mM CaCl2, 5.0 mM MES, pH ...
  • 文献电子报: J Exp Bot:调节拟南芥盐耐受性的新SOS通路 | NMT植物耐盐创新平台
    内容: 基本信息 主题:调节拟南芥盐耐受性的新SOS通路 期刊:Journal of Experimental Botany 研究使用平台:NMT植物耐盐创新平台 标题:The protein kinase complex CBL10–CIPK8–SOS1 functions inArabidopsis to regulate salt tolerance 作者:海南大学江行玉、周扬 doi:10.1093/jxb/erz549       检测指标 Na+       检测样品 拟南芥(WT和cipk8突变体)叶肉组织   离子流实验处理方法     7日龄的拟南芥幼苗在含有100 mM NaCl的MS平板中生长24小时   Na+流结果   ...
  • 文献电子报: 兰大王锁民:木栓质通过排钠保钾及限制水回流促植物耐盐丨NMT植物耐盐创新平台
    内容: 基本信息 主题:木栓质通过排钠保钾及限制水回流促植物耐盐 期刊:Plant and Soil 影响因子:3.259 研究使用平台:NMT植物耐盐创新平台 标题:Aliphatic suberin confers salt tolerance to Arabidopsis by limiting Na+influx, K+efflux and water backflow 作者:兰州大学王锁民、王沛   检测离子/分子指标   Na+,K+   检测样品 拟南芥(WT和cyp86a1突变体)根,距根尖顶端600-800 μm的根表上的点   研究背景(来源:兰州大学官网)       土壤盐渍化是严重制约植物生长和作物产量的主要非生物因素之一。耐盐机制的研究有助于改良植物的抗逆性,对农牧业生产及生态环境的恢复具有重要意义。   相对于盐生植物,非选择性的Na+吸收是大多数甜土植物对盐敏感的重要原因,在根系内皮层细胞壁上,一类保护性屏障木栓质被认为在限制Na+吸收方面发挥着重要作用,但其作用机制尚不明确。王锁民教授团队联合兰州大学萃英讲席教授、加拿大卡尔顿大学Owen Rowland教授团队,发现模式植物拟南芥中根内皮层木栓质能限制Na+通过跨细胞途径而非质外体途径流入维管组织,同时减少水分和K+向土壤的回流,从而赋予植物较强的耐盐性。   离子/分子流实验处理方法   ...

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