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实验设计
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盐胁迫Na+吸收实验体系标准
内容:
一、材料:拟南芥 二、基因型:WT、转基因1、转基因2 三、处理:200mM NaCl处理 四、检测指标:Na+ 五、检测部位:根分生区(过渡区中间) 六、具体方案: Na+吸收(测Na+) 【目的:查看盐胁迫下,谁的Na+进入的少】 一般来说,耐盐材料在盐胁迫下,吸Na+速率更小。 1)对照组 置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组 2)盐胁迫组 a.置于200mM NaCl中处理0.5/1/2 h后,直接检测,记录10分钟,8重复/组 (例如:200mM NaCl处理半小时,测试液50mM NaCl,0.1mM CaCl2,pH6.0,不需要平衡,放入测试液中直接开始测) ...
实验设计
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盐胁迫K+外排实验体系标准
内容:
一、材料:拟南芥 二、基因型:WT、转基因1、转基因2 三、处理:200mM NaCl处理24h 四、检测指标:Na+,K+ 五、检测部位:根分生区(过渡区中间) 六、具体方案: 【目的:查看盐胁迫下,植物保K+能力,也就是哪种植物在盐胁迫下排出去的K+更少】 一般来说,耐盐材料,盐胁迫下排K+更少 1)对照组 置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组 2)盐胁迫组 a. 200mM NaCl胁迫后,立即检测(200mM NaCl实时处理) b.置于200mM NaCl中处理24h后,直接检测,记录10分钟,8重复/组(200mM NaCl预处理24h) 注意:测K+直接在胁迫浓度里测即可,例如测试液:200mM NaCl,0.1 mM KCl,0.1mM CaCl2,pH6.0 ...
实验设计
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盐胁迫Na+外排实验体系标准
内容:
一、 材料:拟南芥 二、 基因型:WT、转基因1、转基因2 三、 处理:200mM NaCl处理24h 四、 检测指标:Na+ 五、 检测部位:根伸长区 六、 具体方案: 【目的:查看盐胁迫下,两种植物排Na+能力的差异】 1)对照组 置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组 2)盐胁迫组 置于200mM NaCl中处理24h后,记录10分钟,8重复/组 测试液:0.5mM NaCl,0.1mM CaCl2,pH6.0 ...
实验设计
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高铵胁迫NH4+外排实验体系标准
内容:
一、 材料:拟南芥 二、 基因型:WT、转基因1、转基因2 三、 处理:10mM NH4Cl处理24h 四、 检测指标:NH4+ 五、 检测部位:根成熟区 六、 具体方案: 置于10mM NH4Cl中处理24h后,直接检测,记录10分钟,8重复/组 测试液:0.1mM NH4Cl,0.1 mM CaCl2,pH6.0 铵外排检测时的样品平衡时间需要尝试,比如平衡20min检测一下、平衡40min检测一下,看看平衡多久能检测到持续稳定的铵外排。 ...
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植物营养NH4+、NO3-实验体系标准
内容:
一、 材料:水稻 二、 基因型/品种:1个对照、1个过表达株系、1个RNAi株系 三、 检测指标:NH4+、NO3- 四、 检测位点:根 五、 重复:8 六、 处理 正常NH4NO3处理3d 低NH4NO3处理3d 高NH4NO3处理3d 【具体方案】 扫点实验:对照样品选取4个重复进行扫点实验,具体检测位点 300μm、800μm、1500μm、2500μm、7500μm,15000μm每个点检测3min 定点实验:根据扫点实验结果,选择NH4+、NO3-吸收最大的点进行定点实验,每个点检测5min 测试费用报价: 扫点: 1(基因型)×1(处理)×1(指标)×6(位点)×4(重复)×132元/样(定点3min) 定点: 3(基因型)×2(指标)×3(实验组)×8(重复)×195元/样(定点:5min) ...
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植物免疫Ca2+流(测叶肉细胞)实验体系标准
内容:
一、材料:水稻 二、基因型/品种:WT、mutant、OE 三、检测部位:叶肉细胞 四、检测指标:Ca2+ 五、处理: 1. 无处理 2. 10 mg/mL chitin处理 24h 3. 病原菌处理24h 4. 10 mg/mL chitin瞬时处理 5. 病原菌瞬时处理 六、具体方案: 处理1、2、3:无处理、10 mg/mL chitin处理24h、病原菌处理24h后,定点检测叶肉细胞10min,8重复/组 处理4、5:10 mg/mL chitin、病原菌处理前检测5min,10 mg/mL chitin、病原菌处理后,检测10分钟(如信号在瞬时处理后10分钟内没有稳定,会延长测试时间),8重复/组 参考文献 保卫细胞:https://mp.weixin.qq.com/s/YovUAnqOYkIViXUHe0dFWw 叶肉细胞:https://mp.weixin.qq.com/s/0UZ_cqxDL_zBxQZz4ok7Pg 测试费用报价: 3(基因型)*1(测试指标)*1(测试部位:根)*1(处理方式:chitin瞬时)*8(重复数)*470 一、材料:水稻 二、基因型/品种:WT、mutant、OE 三、检测部位:叶肉细胞 四、检测指标:Ca2+ 五、处理: 1. 无处理 2. 10 mg/mL chitin处理 24h 3. 病原菌处理24h 4. 10 mg/mL chitin瞬时处理 5. 病原菌瞬时处理 六、具体方案: 处理1、2、3:无处理、10 mg/mL chitin处理24h、病原菌处理24h后,定点检测叶肉细胞10min,8重复/组 处理4、5:10 mg/mL chitin、病原菌处理前检测5min,10 mg/mL chitin、病原菌处理后,检测10分钟(如信号在瞬时处理后10分钟内没有稳定,会延长测试时间),8重复/组 参考文献 保卫细胞:https://mp.weixin.qq.com/s/YovUAnqOYkIViXUHe0dFWw 叶肉细胞:https://mp.weixin.qq.com/s/0UZ_cqxDL_zBxQZz4ok7Pg ...
实验设计
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干旱实验体系标准
内容:
一、 材料:拟南芥 二、 基因型:WT、OE 二、检测部位:保卫细胞 三、检测指标:Ca2+、K+、H+ 四、处理: 1. 对照 2. 自然干旱胁迫10天 五、具体方案 定点检测5分钟,8重复/组 测试液:2.0mM KCl+0.1mM CaCl2+5.0mM MES,pH6.0(可测K、Ca、H、Cl) 平衡时间:如果检测气孔打开的,照光(10000~20000lux)平衡1h ...
实验设计
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植物免疫Ca2+流(测根)实验体系标准
内容:
一、材料:拟南芥 二、品种:WT、mutant 三、检测部位:根内皮层细胞 四、检测指标:Ca2+ 五、处理 1 μM Flg22瞬时处理 六、具体方案: 1 μM Flg22瞬时处理前检测5分钟,1 μM Flg22瞬时处理后检测10min,8重复/组 测试液:0.1mM CaCl2, pH 6.0 平衡时间:4 h ...
实验设计
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盐胁迫+硝酸铵
内容:
执行方案 第一阶段 材料:耐盐,不耐盐 处理:对照(正常培养),盐,盐+硝酸铵 检测指标:钠,钾 具体方案: 1.钠外排(测Na+) 【目的:查看硝酸铵处理是否能促进盐胁迫下,棉花根排Na+速率】 材料:对照组(正常培养的2种样品) 1)对照组 置于-硝酸铵-盐测试液中,平衡20分钟后检测伸长区(+代表有,-代表无),记录3分钟,8重复/组 b.置于+硝酸铵-盐测试液中,平衡20分钟后检测伸长区,记录3分钟,8重复/组 2)处理组 a.置于-硝酸铵+盐(150 mM NaCl)培养液中处理12小时后,移至-硝酸铵-盐测试液中平衡20分钟,检测伸长区,记录5分钟,8重复/组 b.置于+硝酸铵+盐培养液(20 mM NH4NO3,150 mM NaCl)中处理12小时后,移至+硝酸铵-盐测试液中平衡20分钟,检测伸长区,记录5分钟,8重复/组 3)溶液配方 -硝酸铵-盐测试液:0.5 NaCl,pH 6.0 +硝酸铵-盐测试液:20 NH4NO3,0.5 NaCl,pH 6.0 2.钠吸收(测Na+) 【目的:查看硝酸铵处理是否能抑制盐胁迫下,棉花根的吸Na+速率】 材料:对照组(正常培养的2种样品) 1)对照组 置于-硝酸铵-盐测试液中检测 b.置于+硝酸铵-盐测试液中检测 2)处理组 a.置于-硝酸铵+盐处理液中处理20分钟后,置于改良-硝酸铵+盐测试液中,2分钟后直接检测,记录5分钟,8重复/组 b.置于+硝酸铵+盐处理液中处理20分钟后,置于改良+硝酸铵+盐测试液中,2分钟后直接检测,记录5分钟,8重复/组 3)溶液配方 -硝酸铵-盐测试液:0.5 NaCl,pH 6.0 +硝酸铵-盐测试液:20 NH4NO3,0.5 NaCl,pH 6.0 改良-硝酸铵+盐测试液:75 mM NaCl,pH 6.0(7.5/75 mM NaCl,pH 6.0作为高低校正液,斜率符合要求即可) 改良+硝酸铵+盐测试液:20 NH4NO3,75 mM ...
实验设计
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盐胁迫
内容:
材料:样品A、样品B、样品C 处理方式:盐胁迫12h(互为对照) 检测位点:定点检测,根分生区 重复数:8 具体方案 Na+吸收(测Na+)【目的:查看盐胁迫下,谁的根部Na+进入的少】一般来说,耐盐材料在盐胁迫下,根部吸Na+速率更小。1)对照组置于测试液中检测,记录5分钟,8重复/组2)盐胁迫组a.置于盐溶液中处理0.5/1/2 h后,直接检测,记录5分钟,8重复/组 Na+外排(测Na+)【目的:查看盐胁迫下,两种植物根部排Na+能力的差异】这里已经是更进一步地去发现耐盐材料的耐盐机制,是不是根部排Na+能力更强1)对照组置于测试液中检测,记录5分钟,8重复/组2)盐胁迫组置于盐溶液中处理12h后(时间点可以调整),移至测试液中放置20分钟后检测,记录5分钟,8重复/组 K+外排/吸收(测K+) 【目的:查看盐胁迫下,植物根保K+能力,也就是哪种植物在盐胁迫下排出去的K+更少】 一般来说,耐盐材料,盐胁迫下根部排K+更少 1)对照组 置于测试液中检测,记录5分钟,8重复/组 2)盐胁迫组 a.盐胁迫后,立即检测 b.置于盐溶液中处理12h后(时间点可以调整),直接检测,记录5分钟,8重复/组 ...
实验设计
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小麦根Na、K盐胁迫
内容:
材料:小麦 处理:250mM NaCl处理6/12/24/48h后(时间点可以调整) 检测指标:Na+,K+ 检测部位:根分生区 具体方案: Na+吸收(测Na+)【目的:查看盐胁迫下,谁的Na+进入的少】一般来说,耐盐材料在盐胁迫下,吸Na+速率更小。1)对照组置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组2)盐胁迫组a.置于盐溶液中处理0.5/1/2 h后,直接检测,记录10分钟,8重复/组 Na+外排(测Na+)【目的:查看盐胁迫下,两种植物排Na+能力的差异】这里已经是更进一步地去发现耐盐材料的耐盐机制,是不是根部排Na+能力更强1)对照组置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组2)盐胁迫组置于盐溶液中处理6/12/24/48h后(时间点可以调整),记录10分钟,8重复/组 K+吸收/外排(测K+) 【目的:查看盐胁迫下,植物保K+能力,也就是哪种植物在盐胁迫下排出去的K+更少】 一般来说,耐盐材料,盐胁迫下排K+更少 1)对照组 置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组 2)盐胁迫组 a.盐胁迫后,立即检测(即250mM NaCl瞬时处理,处理前检测5min,250mM NaCl处理后检测10min) b.置于盐溶液中处理6/12/24/48h后(时间点可以调整),直接检测,记录10分钟,8重复/组 ...
实验设计
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芍药真菌侵染
内容:
一、材料:芍药 二、处理:对照、三种真菌侵染根部 三、检测指标:Na+,K+ 四、检测部位:根 五、具体方案: Na+吸收(测Na+)【目的:查看盐胁迫下,谁的根部Na+进入的少】一般来说,耐盐材料在盐胁迫下,根部吸Na+速率更小。1)对照组置于测试液中检测,记录5分钟,8重复/组2)真菌侵染组a.置于盐溶液中处理0.5/1/2 h后,直接检测,记录5分钟,8重复/组 Na+外排(测Na+)【目的:查看盐胁迫下,两种植物根部排Na+能力的差异】这里已经是更进一步地去发现耐盐材料的耐盐机制,是不是根部排Na+能力更强1)对照组置于测试液中检测,记录5分钟,8重复/组2)真菌侵染组置于盐溶液中处理6/12/24/48h后(时间点可以调整),移至测试液中放置20分钟后检测,记录5分钟,8重复/组 K+外排(测K+) 【目的:查看盐胁迫下,植物根保K+能力,也就是哪种植物在盐胁迫下排出去的K+更少】 一般来说,耐盐材料,盐胁迫下根部排K+更少 1)对照组 置于测试液中检测,记录5分钟,8重复/组 2)真菌侵染组 a.盐胁迫后,立即检测 b.置于盐溶液中处理6、12、24、48h后(时间点可以调整),直接检测,记录5分钟,8重复/组 ...
实验设计
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葡萄NaC+硫酸铵处理
内容:
【方案一:预处理(长时处理)】 材料:葡萄 处理: CK 200mM NaCl +0.2mM硫酸铵处理2、4、6d 200mM NaCl +2mM硫酸铵处理2、4、6d 检测指标:Na+、H+、IAA、NO3-、NH4+ 检测部位:根分生区过渡区(Na+、H+、IAA)、成熟区(NO3-、NH4+) 具体方案: Na+外排(测Na+)【目的:查看盐胁迫下,两种植物排Na+能力的差异】1)对照组置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组2)处理组复合溶液处理2、4、6d后,定点检测10分钟,8重复/组 H+、IAA 、NO3-、NH4+ 复合溶液处理2、4、6d后,定点检测10分钟,8重复/组 【方案二:瞬时处理】 材料:葡萄 处理: CK 200mM NaCl +0.2mM硫酸铵处理2、4、6d 200mM NaCl +2mM硫酸铵处理2、4、6d 检测指标:Na+、H+、IAA、NO3-、NH4+ 检测部位:根分生区过渡区(Na+、H+、IAA)、成熟区(NO3-、NH4+) 具体方案: Na+吸收(测Na+) 【目的:查看盐胁迫下,谁的Na+进入的少】 一般来说,耐盐材料在盐胁迫下,吸Na+速率更小。 1)对照组 置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组 2)盐胁迫组 0.2、2mM硫酸铵处理2、4、6d后,200mM NaCl处理0.5h后,直接检测,记录10分钟,8重复/组 2. H+、IAA、NO3-、NH4+ 0.2mM、2mM硫酸铵处理2、4、6d后,200mM NaCl瞬时处理前检测3min,200mM NaCl瞬时处理后检测10min ...
实验设计
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拟南芥根PEG
内容:
材料:拟南芥 基因型:WT、OE1、OE2、RNAi 检测部位:根分生区(过渡区中点) 检测指标:Ca2+、Na+、K+、Cl- 处理: 150mM NaCl 145mM NaCl+5mM Na2CO3 10%PEG6000 具体方案: Ca2+预处理150mM NaCl、145 mM NaCl+5mM Na2CO3、10%PEG处理6h后(处理时间可调整),定点检测10分钟在,8重复/组 Ca2+实时处理150mM NaCl、145mM NaCl+5mM Na2CO3、10%PEG处理前检测5分钟,150mM NaCl、145mM NaCl+5mM Na2CO3、10%PEG处理10min后检测15-20分钟(经费允许可以持续检测30分钟),8重复/组 Na+吸收(测Na+)【目的:查看盐碱胁迫下,谁的Na+进入的少】一般来说,耐盐碱材料在盐胁迫下,吸Na+速率更小。1)对照组置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组2)胁迫组a.置于150mM NaCl、145 mM NaCl+5mM Na2CO3中处理0.5/1/2h后,直接检测,记录10分钟,8重复/组 Na+外排(测Na+)【目的:查看盐碱胁迫下,两种植物排Na+能力的差异】这里已经是更进一步地去发现耐盐碱材料的耐受机制,是不是根部排Na+能力更强1)对照组置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组2)胁迫组置于150mM NaCl、145 mM NaCl+5mM Na2CO3中处理6/12/24/48h后(时间点可以调整),记录10分钟,8重复/组 K+吸收/外排(测K+) 【目的:查看盐碱胁迫下,植物保K+能力,也就是哪种植物在盐碱胁迫下排出去的K+更少】 一般来说,耐盐碱材料,胁迫下排K+更少 1)对照组 置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组 2)胁迫组 150mM NaCl、145 mM NaCl+5mM ...
实验设计
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玫瑰根盐胁迫
内容:
一、材料:玫瑰 二、处理:对照、3%NaCl、5%NaCl 三、检测指标:Na+,K+ 四、检测部位:根分生区 五、具体方案: Na+吸收(测Na+)【目的:查看盐胁迫下,谁的根部Na+进入的少】一般来说,耐盐材料在盐胁迫下,根部吸Na+速率更小。1)对照组置于测试液中检测,记录5分钟,8重复/组2)盐胁迫组a.置于盐溶液中处理0.5/1/2 h后,直接检测,记录5分钟,8重复/组 Na+外排(测Na+)【目的:查看盐胁迫下,两种植物根部排Na+能力的差异】这里已经是更进一步地去发现耐盐材料的耐盐机制,是不是根部排Na+能力更强1)对照组置于测试液中检测,记录5分钟,8重复/组2)盐胁迫组置于盐溶液中处理6/12/24/48h后(时间点可以调整),移至测试液中放置20分钟后检测,记录5分钟,8重复/组 K+吸收/外排(测K+) 【目的:查看盐胁迫下,植物根保K+能力,也就是哪种植物在盐胁迫下排出去的K+更少】 一般来说,耐盐材料,盐胁迫下根部排K+更少 1)对照组 置于测试液中检测,记录5分钟,8重复/组 2)盐胁迫组 a.盐胁迫后,立即检测 b.置于盐溶液中处理6、12、24、48h后(时间点可以调整),直接检测,记录5分钟,8重复/组 ...
实验设计
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花花柴根Na、K盐胁迫
内容:
【方案一:NaCl浓度递增处理】 材料:花花柴 处理:0、100、200、300、400mM NaCl以递增的方式添加,直到添加到400mM NaCl后,再处理24h。 检测指标:Na+,K+ 检测部位:根分生区 具体方案: Na+外排(测Na+)【目的:查看盐胁迫下,两种植物排Na+能力的差异】1)对照组置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组2)盐胁迫组置于盐溶液中处理24h后,记录10分钟,8重复/组 K+吸收/外排(测K+) 【目的:查看盐胁迫下,植物保K+能力,也就是哪种植物在盐胁迫下排出去的K+更少】 一般来说,耐盐材料,盐胁迫下排K+更少 1)对照组 置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组 2)盐胁迫组 a.盐胁迫后,立即检测(即100、200、300、400mM NaCl瞬时处理,处理前检测5min,NaCl处理后检测10min) b.置于盐溶液中处理24h后,直接检测,记录10分钟,8重复/组 【方案二:NaCl直接处理,可能植物有应激反应,但是不会影响离子流速的变化】 材料:花花柴 处理:0、100、200、300、400mM NaCl处理6/12/24/48h后(时间点可以调整) 检测指标:Na+,K+ 检测部位:根分生区 具体方案: Na+吸收(测Na+)【目的:查看盐胁迫下,谁的Na+进入的少】一般来说,耐盐材料在盐胁迫下,吸Na+速率更小。1)对照组置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组2)盐胁迫组a.置于盐溶液中处理0.5/1/2 h后,直接检测,记录0分钟,8重复/组 Na+外排(测Na+)【目的:查看盐胁迫下,两种植物排Na+能力的差异】这里已经是更进一步地去发现耐盐材料的耐盐机制,是不是根部排Na+能力更强1)对照组置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组2)盐胁迫组置于盐溶液中处理6/12/24/48h后(时间点可以调整),记录10分钟,8重复/组 K+吸收/外排(测K+) 【目的:查看盐胁迫下,植物保K+能力,也就是哪种植物在盐胁迫下排出去的K+更少】 一般来说,耐盐材料,盐胁迫下排K+更少 1)对照组 置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组 2)盐胁迫组 a.盐胁迫后,立即检测(即100、200、300、400mM NaCl瞬时处理,处理前检测5min,NaCl处理后检测10min) b.置于盐溶液中处理6/12/24/48h后(时间点可以调整),直接检测,记录10分钟,8重复/组 ...
实验设计
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枸杞、番茄根叶肉Na、K盐胁迫
内容:
材料:枸杞、番茄 基因型:WT、转基因 处理:100mM NaCl(浓度可调整) 检测指标:Na+,K+ 检测部位:根分生区、叶肉细胞 具体方案: Na+吸收(测Na+)【目的:查看盐胁迫下,谁的Na+进入的少】一般来说,耐盐材料在盐胁迫下,吸Na+速率更小。1)对照组置于测试液中检测,记录5分钟,8重复/组2)盐胁迫组a.置于盐溶液中处理0.5/1/2 h后,直接检测,记录5分钟,8重复/组 Na+外排(测Na+)【目的:查看盐胁迫下,两种植物排Na+能力的差异】这里已经是更进一步地去发现耐盐材料的耐盐机制,是不是根部排Na+能力更强1)对照组置于测试液中检测,记录5分钟,8重复/组2)盐胁迫组置于盐溶液中处理6/12/24/48h后(时间点可以调整),记录5分钟,8重复/组 K+吸收/外排(测K+) 【目的:查看盐胁迫下,植物保K+能力,也就是哪种植物在盐胁迫下排出去的K+更少】 一般来说,耐盐材料,盐胁迫下排K+更少 1)对照组 置于测试液中检测,记录5分钟,8重复/组 2)盐胁迫组 a.盐胁迫后,立即检测 b.置于盐溶液中处理6、12、24、48h后(时间点可以调整),直接检测,记录5分钟,8重复/组 ...
实验设计
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斑马鱼胚胎酸碱处理
内容:
一、材料:斑马鱼 二、检测指标:H+ 三、检测位点:斑马鱼胚胎 四、处理: a.对照(pH7.0) b.酸处理(pH5.0)3-4天 c.碱处理(pH8.0/9.0)3-4天 五、具体实验细节: 处理3-4天,出现卵黄囊时开始检测,定点检测10min。 六、重复数:8 测试液: 对照:0.5mM NaCl,0.16mM KH2PO4,0.16mM K2HPO4,0.2mM MgSO4,0.2mM CaSO4,pH7.0 酸处理:0.5mM NaCl,0.16mM KH2PO4,0.16mM K2HPO4,0.2mM MgSO4,0.2mM CaSO4,pH5.0 碱处理:0.5mM NaCl,0.16mM KH2PO4,0.16mM K2HPO4,0.2mM MgSO4,0.2mM CaSO4,10mM NaHCO3,pH8.0/9.0 ...
实验设计
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白菜根盐胁迫
内容:
实验一 材料:大白菜 基因型/品种:自交系A03 检测部位:根分生区(H+)、根成熟区(Cd2+) 检测指标:H+(流速、根表pH)、Cd2+(流速) 处理: CK 200mM NaCl处理 2d 具体方案: H+、Cd2+ 200mM NaCl处理2d后,定点检测10分钟在,8重复/组 实验二:离子浓度成像检测 一、材料:大白菜 二、基因型/品种:自交系A03 三、检测部位:根分生区 四、检测指标:H+ 五、处理: CK 200mM NaCl处理 2d 材料:大白菜 基因型:自交系A03 检测部位:根分生区(过渡区中点) 检测指标:Ca2+、Na+、K+、Cl- 处理: CK 200mM NaCl处理 2d 具体方案: Ca2+预处理200mM NaCl处理6h后(处理时间可调整,因为Ca2+变化较快,所以盐处理时间比较短,处理2天时间较长可能信号变化不明显),定点检测10分钟,8重复/组 Ca2+实时处理200mM NaCl处理前检测5分钟,200mM NaCl处理10分钟后检测15-20分钟(经费允许可以持续检测30分钟),8重复/组 Na+吸收(测Na+)【目的:查看盐碱胁迫下,谁的Na+进入的少】一般来说,耐盐碱材料在盐胁迫下,吸Na+速率更小。1)对照组置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组2)胁迫组a.置于200mM NaCl中处理0.5/1/2h后,直接检测,记录10分钟,8重复/组 Na+外排(测Na+)【目的:查看盐碱胁迫下,两种植物排Na+能力的差异】这里已经是更进一步地去发现耐盐碱材料的耐受机制,是不是根部排Na+能力更强1)对照组置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组2)胁迫组置于200mM NaCl中处理2d后(时间点可以调整),记录10分钟,8重复/组 K+吸收/外排(测K+) 【目的:查看盐碱胁迫下,植物保K+能力,也就是哪种植物在盐碱胁迫下排出去的K+更少】 一般来说,耐盐碱材料,胁迫下排K+更少 1)对照组 置于测试液中检测,记录10分钟,8重复/组 2)胁迫组 200mM NaCl胁迫后,立即检测 b.置于200mM NaCl中处理48h后(时间点可以调整),直接检测,记录10分钟,8重复/组 6. Cl-方案参考Na+ ...
实验设计
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烟草根盐低温干旱
内容:
材料:烟草 基因型/品种:PBI121-GFP、PBI121-2.1GFP、PBI121-2.2GFP 检测位点:根分生区 【实验目的】前期的实验是看到了基因可以增强植物的抗逆性,现在想用NMT再验证一下 方案一:预处理—利于观察离子转运的长时效应 【盐胁迫—预处理】 检测指标:Na+、K+ Na+吸收(测Na+)目的:查看盐胁迫下,谁的根部Na+进入的少。一般来说,耐盐材料在盐胁迫下,根部吸Na+速率更小。1)对照组置于测试液中检测,记录3分钟,6重复/组2)盐胁迫组a.置于250mM盐溶液中处理0.5/1/2 h后,直接检测,记录3分钟,6重复/组 Na+外排(测Na+)目的:查看盐胁迫下,两种植物根部排Na+能力的差异。这里已经是更进一步地去发现耐盐材料的耐盐机制,是不是根部排Na+能力更强。1)对照组置于测试液中检测,记录3分钟,6重复/组2)盐胁迫组置于250mM盐溶液中处理12h后检测,记录3分钟,6重复/组 K+外排/吸收(测K+) 目的:查看盐胁迫下,植物根保K+能力,也就是哪种植物在盐胁迫下排出去的K+更少。一般来说,耐盐材料,盐胁迫下根部排K+更少 1)对照组 置于测试液中检测,记录5分钟,6重复/组 2)盐胁迫组 置于盐溶液中处理12h后,直接检测,记录3分钟,6重复/组 【干旱胁迫—预处理】 检测指标:Ca2+、H+ 具体方法:10% PEG处理12h后,直接检测,记录3分钟,6重复/组 【低温胁迫—预处理】 检测指标:Ca2+ 具体方法:4℃低温处理12h后,直接检测,记录3分钟,6重复/组 方案二:瞬时处理—根据经验,实时处理后,离子转运信号变化相对较强,利于观察不用处理间的差异。 【盐胁迫—瞬时处理】 检测指标:Na+、K+ 具体方法 Na+250mM NaCl处理前定点检测3min,250mM NaCl处理前处理后定点检测10min,6重复/组 K+ 250mM NaCl处理前定点检测3min,250mM NaCl处理前处理后定点检测10min,6重复/组 【干旱胁迫—瞬时处理】 检测指标:Ca2+、H+ 具体方法:10% PEG处理前定点检测3min,10% PEG处理后定点检测10min,6重复/组 【低温胁迫—瞬时处理】 检测指标:Ca2+ 具体方法:4℃低温处理前定点检测3min,4℃低温处理后定点检测10min,6重复/组 方案三 材料:烟草 基因型/品种:PBI121-GFP、PBI121-2.1GFP、PBI121-2.2GFP 三、检测位点:根分生区(过渡区中点) 【实验目的】前期的实验是看到了基因可以增强植物的抗逆性,现在想用NMT再验证一下 【盐胁迫—预处理】 检测指标:Na+、K+ 具体方法:150mM NaCl处理24h后,定点检测5min,8重复/组 【干旱胁迫—实时处理】 检测指标:Ca2+、K+ 具体方法: Ca2+实时处理:15% PEG处理前检测5分钟,15% PEG处理检测10min,8重复/组 K+预处理:15% PEG处理5h后,定点检测5min,8重复/组 【低温胁迫—实时处理】 检测指标:Ca2+、K+ 具体方法: Ca2+实时处理:4℃低温处理前检测5分钟,4℃低温处理后检测10min,8重复/组 K+预处理:4℃低温处理5h后,定点检测5min,8重复/组 测试液: 盐胁迫测Na+:1mM NaCl,0.1mM CaCl2,pH6.0盐胁迫测K+:150mM NaCl,0.1mM CaCl2,0.1mM KCl,pH6.0 干旱胁迫测Ca2+、K+瞬时加药前:0.5mM CaCl2,0.5mM KCl,pH6.0瞬时加药后/预处理:15% PEG,0.5mM CaCl2,0.5mM KCl,pH6.0 低温胁迫测Ca2+、K+:0.1mM CaCl2,0.1mM KCl,pH6.0 ...
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