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• 实验设计: 盐胁迫Na+外排实验体系标准
  内容： 一、   材料：拟南芥 二、   基因型：WT、转基因1、转基因2 三、   处理：200mM NaCl处理24h 四、   检测指标：Na+ 五、   检测部位：根伸长区   六、   具体方案： 【目的：查看盐胁迫下，两种植物排Na+能力的差异】   1）对照组 置于测试液中检测，记录10分钟，8重复/组 2）盐胁迫组 置于200mM NaCl中处理24h后，记录10分钟，8重复/组     测试液：0.5mM NaCl，0.1mM CaCl2，pH6.0 ...
• 实验设计: 高铵胁迫NH4+外排实验体系标准
  内容： 一、   材料：拟南芥 二、   基因型：WT、转基因1、转基因2 三、   处理：10mM NH4Cl处理24h 四、   检测指标：NH4+ 五、   检测部位：根成熟区   六、   具体方案： 置于10mM NH4Cl中处理24h后，直接检测，记录10分钟，8重复/组   测试液：0.1mM NH4Cl，0.1 mM CaCl2，pH6.0   铵外排检测时的样品平衡时间需要尝试，比如平衡20min检测一下、平衡40min检测一下，看看平衡多久能检测到持续稳定的铵外排。   ...
• 实验设计: 干旱实验体系标准
  内容： 一、 材料：拟南芥 二、 基因型：WT、OE 二、检测部位：保卫细胞 三、检测指标：Ca2+、K+、H+ 四、处理： 1. 对照 2. 自然干旱胁迫10天   五、具体方案 定点检测5分钟，8重复/组   测试液：2.0mM KCl+0.1mM CaCl2+5.0mM MES，pH6.0（可测K、Ca、H、Cl） 平衡时间：如果检测气孔打开的，照光（10000~20000lux）平衡1h ...
• 实验设计: 植物免疫Ca2+流（测根）实验体系标准
  内容： 一、材料：拟南芥 二、品种：WT、mutant 三、检测部位：根内皮层细胞 四、检测指标：Ca2+ 五、处理 1 μM Flg22瞬时处理   六、具体方案： 1 μM Flg22瞬时处理前检测5分钟，1 μM Flg22瞬时处理后检测10min，8重复/组   测试液：0.1mM CaCl2, pH 6.0 平衡时间：4 h ...
• 实验设计: 斑马鱼胚胎酸碱处理
  内容： 一、材料：斑马鱼 二、检测指标：H+ 三、检测位点：斑马鱼胚胎 四、处理： a.对照（pH7.0） b.酸处理（pH5.0）3-4天 c.碱处理（pH8.0/9.0）3-4天 五、具体实验细节： 处理3-4天，出现卵黄囊时开始检测，定点检测10min。 六、重复数：8 测试液： 对照：0.5mM NaCl，0.16mM KH2PO4，0.16mM K2HPO4，0.2mM MgSO4，0.2mM CaSO4，pH7.0 酸处理：0.5mM NaCl，0.16mM KH2PO4，0.16mM K2HPO4，0.2mM MgSO4，0.2mM CaSO4，pH5.0 碱处理：0.5mM NaCl，0.16mM KH2PO4，0.16mM K2HPO4，0.2mM MgSO4，0.2mM CaSO4，10mM NaHCO3，pH8.0/9.0 ...
• 实验设计: 烟草根盐低温干旱
  内容： 材料：烟草 基因型/品种：PBI121-GFP、PBI121-2.1GFP、PBI121-2.2GFP 检测位点：根分生区   【实验目的】前期的实验是看到了基因可以增强植物的抗逆性，现在想用NMT再验证一下 方案一：预处理—利于观察离子转运的长时效应 【盐胁迫—预处理】 检测指标：Na+、K+ Na+吸收（测Na+）目的：查看盐胁迫下，谁的根部Na+进入的少。一般来说，耐盐材料在盐胁迫下，根部吸Na+速率更小。1）对照组置于测试液中检测，记录3分钟，6重复/组2）盐胁迫组a.置于250mM盐溶液中处理0.5/1/2 h后，直接检测，记录3分钟，6重复/组 Na+外排（测Na+）目的：查看盐胁迫下，两种植物根部排Na+能力的差异。这里已经是更进一步地去发现耐盐材料的耐盐机制，是不是根部排Na+能力更强。1）对照组置于测试液中检测，记录3分钟，6重复/组2）盐胁迫组置于250mM盐溶液中处理12h后检测，记录3分钟，6重复/组 K+外排/吸收（测K+） 目的：查看盐胁迫下，植物根保K+能力，也就是哪种植物在盐胁迫下排出去的K+更少。一般来说，耐盐材料，盐胁迫下根部排K+更少 1）对照组 置于测试液中检测，记录5分钟，6重复/组 2）盐胁迫组 置于盐溶液中处理12h后，直接检测，记录3分钟，6重复/组 【干旱胁迫—预处理】 检测指标：Ca2+、H+ 具体方法：10% PEG处理12h后，直接检测，记录3分钟，6重复/组 【低温胁迫—预处理】 检测指标：Ca2+ 具体方法：4℃低温处理12h后，直接检测，记录3分钟，6重复/组 方案二：瞬时处理—根据经验，实时处理后，离子转运信号变化相对较强，利于观察不用处理间的差异。 【盐胁迫—瞬时处理】 检测指标：Na+、K+ 具体方法 Na+250mM NaCl处理前定点检测3min，250mM NaCl处理前处理后定点检测10min，6重复/组 K+ 250mM NaCl处理前定点检测3min，250mM NaCl处理前处理后定点检测10min，6重复/组 【干旱胁迫—瞬时处理】 检测指标：Ca2+、H+ 具体方法：10% PEG处理前定点检测3min，10% PEG处理后定点检测10min，6重复/组 【低温胁迫—瞬时处理】 检测指标：Ca2+ 具体方法：4℃低温处理前定点检测3min，4℃低温处理后定点检测10min，6重复/组   方案三 材料：烟草 基因型/品种：PBI121-GFP、PBI121-2.1GFP、PBI121-2.2GFP 三、检测位点：根分生区（过渡区中点） 【实验目的】前期的实验是看到了基因可以增强植物的抗逆性，现在想用NMT再验证一下 【盐胁迫—预处理】 检测指标：Na+、K+ 具体方法：150mM NaCl处理24h后，定点检测5min，8重复/组 【干旱胁迫—实时处理】 检测指标：Ca2+、K+ 具体方法： Ca2+实时处理：15% PEG处理前检测5分钟，15% PEG处理检测10min，8重复/组 K+预处理：15% PEG处理5h后，定点检测5min，8重复/组 【低温胁迫—实时处理】 检测指标：Ca2+、K+ 具体方法： Ca2+实时处理：4℃低温处理前检测5分钟，4℃低温处理后检测10min，8重复/组 K+预处理：4℃低温处理5h后，定点检测5min，8重复/组 测试液： 盐胁迫测Na+：1mM NaCl，0.1mM CaCl2，pH6.0盐胁迫测K+：150mM NaCl，0.1mM CaCl2，0.1mM KCl，pH6.0 干旱胁迫测Ca2+、K+瞬时加药前：0.5mM CaCl2，0.5mM KCl，pH6.0瞬时加药后/预处理：15% PEG，0.5mM CaCl2，0.5mM KCl，pH6.0 低温胁迫测Ca2+、K+：0.1mM CaCl2，0.1mM KCl，pH6.0 ...
• 实验设计: 拟南芥根 叶酸+硝酸钾处理 NO3-
  内容： 方案一 材料：拟南芥 品种：WT、atdfb-3 处理： 9.4mM KNO3处理1d、3d、6d 9.4mM KNO3 +叶酸处理1d、3d、6d（仅处理atdfb-3突变体） 检测指标：NO3- 检测部位：根成熟区 具体方案： 处理1d、3d、6d后，检测10分钟稳定数据 七、重复数：6 方案二 材料：拟南芥 品种：WT、atdfb-3 处理： 9.4mM KNO3处理6d 9.4mM KNO3 +叶酸实时处理（仅处理atdfb-3突变体） 检测指标：NO3- 检测部位：根成熟区 具体方案： 9.4mM KNO3处理6d后，检测10分钟稳定数据，8重复/组 9.4mM KNO3 +叶酸实时处理前检测5分钟，9.4mM KNO3 +叶酸实时处理后持续检测20分钟（摸索最佳处理时间），4重复/组 测试液 9.4mM KNO3，0.1mM CaCl2，pH6.0 叶酸，9.4mM KNO3，0.1mM CaCl2，pH6.0 2021.9.9 材料：拟南芥 品种：WT、atdfb-3 处理： 9.4mM KNO3处理6d 9.4mM KNO3+50μM叶酸处理6d 检测指标：NO3- 检测部位：根成熟区 具体方案： 处理6d后，检测10分钟稳定数据 七、重复数：6 ...
• 实验设计: 拟南芥根盐胁迫
  内容： 周四早上： 先进行周五早上盐胁迫苗子的处理（需要NaCl胁迫24小时） 周五： 上午对前一天NaCl处理的苗子进行测试 实验1、基因A对盐胁迫介导的跨膜离子流动的影响，共12个样品 检测样品：拟南芥 检测部位：根 检测样品品种：A和B（*2） 检测指标：Na+外排 处理方式：正常培养5~6天后，100mM NaCl处理24h后，放入测试液。 检测位点：扫点：根毛区、分生区、伸长区（*3），优先测根毛区。 测定时间：对照组：检测3分钟（三个区域测同一棵苗，进行扫点）盐胁迫组：测5分钟（三个区域测同一棵苗，进行扫点） 重复数：3（*3） 处理液：NaCl（100mM），pH5.8测试液：NaCl（0.5mM），pH5.8   实验2、基因A对冷胁迫介导的跨膜离子流动的影响，共12个样品 检测样品：拟南芥 检测部位：根 检测样品品种：A和B（*2） 检测指标：Ca2+ 处理方式：正常培养后冷胁迫瞬时处理 检测位点：分生区、伸长区（*2），优先测分生区。 测定时间：处理前：检测3分钟4℃处理瞬时处理后：检测10分钟（处理前处理后测同一棵苗） 重复数：3（*3） 测试液：0.5 mM CaCl2，pH5.8低温测试液：0.5 mM CaCl2，pH5.8 ...
• 实验设计: 棉花纤维胚珠H
  内容： 检测样品：棉花 基因型：WT、转基因1、转基因2 检测部位：棉花纤维顶端、侧边 处理：1DPA、3DPA 检测指标：H+ 具体实施方案： 所有材料选择同一位置的胚珠上相同区域的纤维细胞进行检测，检测10分钟，8重复/组 ========= 测试液：0.1mM CaCl2，pH6.0 ...
• 实验设计: 梨果皮CaCl2处理
  内容： 【方案一】 材料：梨果实 检测部位：果皮（在注射孔周围取样，检测靠近果肉的那一侧） 检测指标：Ca2+（流速）、H2O2（流速） 处理： 注射空载 转基因1 转基因1+2%CaCl2浸泡5s 转基因2 转基因2+2%CaCl2浸泡5s 2%CaCl2实时处理 具体方案： 1、2、3、4、5组处理定点检测10分钟，8重复/组 6组处理2%CaCl2实时处理后持续监测15分钟，8重复/组 测试液：0.01mM CaCl2，pH6.0 【方案二】 材料：梨果实 检测部位：果皮（在注射孔周围取样，检测靠近果肉的那一侧） 检测指标：Ca2+（检测果实内部质外体浓度）、H2O2（浓度） 处理： 注射空载 转基因1 转基因1+2%CaCl2浸泡5s 转基因2 转基因2+2%CaCl2浸泡5s 具体方案： 定点检测，8重复/组 测试液：0.01mM CaCl2，pH6.0 ...
• 实验设计: 番茄叶肉细胞/低温/光照黑暗/瞬时
  内容： 实验1—IAA、H2O2、H+、Ca2+流速 检测样品：番茄 检测部位：叶肉细胞 检测样品品种：AC 检测指标：IAA、H2O2、H+、Ca2+ 处理方式： 常温+光照（光照持续伴随样品） 常温+黑暗（黑暗持续伴随样品） 4℃低温瞬时+光照（光照持续伴随样品） 4℃低温瞬时+黑暗（黑暗持续伴随样品） 27mM CaCl2处理2h+常温+光照（光照持续伴随样品） 27mM CaCl2处理2h +常温+黑暗（黑暗持续伴随样品） 27mM CaCl2处理2h+4℃低温瞬时+光照（光照持续伴随样品） 27mM CaCl2处理2h +4℃低温瞬时+黑暗（黑暗持续伴随样品） 检测位点：叶肉细胞定点检测 测定时间： a、b、e、f组定点检测5min c、d、g、h组检测20min（先看前2-3个样品的数据稳定情况再进行时间调整） 重复数：8 测试液IAA、H2O2、H+、Ca2+：0.1 mM KCl, 0.1 mM CaCl2, 0.1 mM MgCl2, 0.5 mM NaCl, 0.3 mM MES, 0.2 mM Na2SO4, pH ...
• 实验设计: 沉水植物龙舌草叶片表面碳酸根处理
  内容： 材料：沉水植物龙舌草 处理： 0.5mM NaHCO3+0.5mM KHCO3+0.05mM KCl 0.5mM NaHCO3+0.5mM KHCO3+0.3mM DIDS+0.05mM KCl 0.5mM NaHCO3+0.5mM KHCO3+0.2mM DES+0.05mM KCl 0.5mM NaHCO3+0.5mM KHCO3+0.3mM KCl 0.5mM NaHCO3+0.5mM KHCO3+0.3mM DIDS+0.3mM KCl 0.5mM NaHCO3+0.5mM KHCO3+0.2mM DES+0.3mM KCl 三、检测指标：H+、Cl- 四、检测位点：叶片表面（正面和反面。非叶肉细胞，不用撕开。） 五、重复：8 六、具体方案 在①-⑥处理30分钟后，在载物台上静置7分钟，定点检测叶片正、反面各5min 七、测试液 H+（提前配置，静置4h以上使用）： 0.5mM NaHCO3+0.5mM KHCO3+0.05mM ...
• 实验设计: 昆虫触角
  内容： 检测样品：昆虫 检测部位：触角 检测指标：K+ 检测位点及测定时间：扫点测量，每个位点测定稳定数据时间3min 测试液：0.1 mM KCl, 0.1 mM CaCl2, 0.1 mM MgCl2, 0.5 mM NaCl, 0.3 mM MES, 0.2 mMNa2SO4, pH 6.0 ...
• 实验设计: 番茄叶肉细胞/低温/光照黑暗/瞬时
  内容： 实验1—H+、Ca2+流速 检测样品：番茄 检测部位：叶肉细胞 检测样品品种：AC 检测指标：H+、Ca2+ 处理方式： 常温+黑暗（黑暗持续伴随样品） 4℃低温瞬时+黑暗（黑暗持续伴随样品） 27mM CaCl2处理2h +常温+黑暗（黑暗持续伴随样品） 27mM CaCl2处理2h +4℃低温瞬时+黑暗（黑暗持续伴随样品） 检测位点：叶肉细胞定点检测 测定时间： a、c组定点检测5min b、d组检测15min （现场会根据前2个样品的实际信号变化情况，优化实时处理后的检测时长。例如15min后信号还在持续变化，则延长实时处理后的检测时长；如不到15min信号已经处于稳定期，则缩短实时处理后的检测时长。） 重复数：8 测试液 H+、Ca2+：0.1 mM KCl, 0.1 mM CaCl2, 0.1 mM MgCl2, 0.5 mM NaCl, 0.3 mM MES, 0.2 mM Na2SO4, pH 6.0     实验3—Ca2+流速 检测样品：番茄 检测部位：叶肉细胞 检测样品品种：沉默A、沉默B、沉默C、沉默D、沉默E 检测指标：Ca2+ 处理方式： 常温+黑暗（黑暗持续伴随样品） 4℃低温瞬时+黑暗（黑暗持续伴随样品） 27mM CaCl2处理2h+常温+黑暗 27mM ...
• 实验设计: 拟南芥下表皮保卫细胞
  内容： 检测样品是：拟南芥；检测部位是：拟南芥下表皮保卫细胞 品种：fim1-1、fim1-2、fim2-2 检测指标：H2O2 处理方式：50 μM ABA处理时间为15min 检测位点： 定点测量拟南芥下表皮保卫细胞没有处理的样品检测10min，50 μM ABA处理15min后检测10min 重复数：3 测试液 处理前：2.0mM KCl, 0.1 mM CaCl2, 5.0 mM MES, pH 6.0； 处理后：50 μM ABA, 2.0mM KCl, 0.1 mM CaCl2, 5.0 mM MES, pH ...
• 设备操作: 参比电极的作用是什么？
  内容：  （1）和传感器（电极）、测试液、前置放大器一起构成电路回路。  （2）提供一个参考电位。 ...
• 设备操作: 参比电极的使用及注意事项
  内容： 非损伤微测系统中的参比电极主要有两个作用： 和流速传感器、测试液、前置放大器一起构成电路回路， 提供一个参考电位。 使用时要注意以下几点： 灌充溶液时，要将塑料管连接部分从后端拧下来，从后端用流速传感器灌充液的那种细的注射头灌充溶液，参比内液不要灌充太多，浸没过氯化银丝部分1cm即可。 新灌充3M KCl后，需要让氯化银丝在参比内液中浸泡24小时以上，这样电位稳定得快一些。 灌充溶液时，注意保护好内部银丝尖端的氯化银部分，不要私自用砂纸磨或者剪断。 每次使用完毕后，将参比电极浸泡在3MKCL溶液中（即收纳管内），不要暴露在空气中，如果长时间不使用，需要将塑料管中的溶液全部吸出，再用蒸馏水润洗几遍，晾干后保存。 当测试过程中出现电位不正常时，可以首先更换传感器（或LIX），排除传感器问题后，最有可能是参比电极的问题，大概有以下几种情况： 静态电位显示+-5.000V：检查参比电极接口是否插入前置放大器接口中，参比电极是否放入测试液中，参比电极中的溶液是否没过银丝尖端。 校正值在正常范围内，但是比起经验值偏大或偏小（比如低于-150mV,高于500mV等），首先确定测试液和流速传感器灌充液浓度是否正确，之后检查参比电极中的灌充液浓度是否正常，可以重新配制后重新灌充；如果还不行的话，可以更换参比电极的塑料管，新的参比电极附带一个备用的。 当电位变化很快时，除了流速传感器的电位漂移外，还有可能是参比电极漏液造成的，可以更换塑料管试试。 参比电极位置应尽量远离样品；最好深入液面5mm；测试时尽量将参比电极相对与样品的位置固定。 ...
• 实验设计: 测试液成分如何确定？
  内容： 测试液成分： 1.参考NISC测试液标准 v2.5 (可见附件) 2.根据样品或是研究方向、待测指标等借鉴文献中使用的溶液成分。NISC文献库 3.自行设计。 需要强调的是，无论您选择什么样的溶液成分，需要保证非损伤微测系统在此溶液环境下可以正常工作。所以只需在正式检测前，进行一个简单的预实验操作——查看此溶液对系统是否会产生影响，即可！   使用旭月公司设计的溶液配制小工具可以保证配制溶液的准确性！ 为了提高实验效率以及得到更好的实验结果，可以选择采购旭月公司提供的溶液。   溶液配制视频教程: ...
• 文献电子报: Food Energy Secur农科院作物所：NMT发现E3泛素连接酶基因TaPUB15增强了水稻在盐胁迫下排钠保钾的能力
  内容： 基本信息 主题：NMT发现E3泛素连接酶基因TaPUB15增强了水稻在盐胁迫下排钠保钾的能力 期刊：Food and Energy Security 影响因子：5.242 研究使用平台：NMT植物耐盐创新平台 标题：TaPUB15, a U-Box E3 ubiquitin ligase gene from wheat, enhances salt tolerance in rice 作者：中国农业科学院作物研究所景蕊莲、毛新国、李巧茹   检测离子/分子指标   Na+、K+   检测样品   2周龄水稻幼苗（转基因、WT）根分生区（距根尖100 μm根表上的点）     中文摘要（谷歌机翻）     植物U-box（PUB）E3泛素连接酶在对环境胁迫和激素信号的响应中起着至关重要的作用，但在小麦（Triticum ...
• 文献电子报: PCP李银心：NMT发现盐胁迫下磷脂酰丝氨酸合酶可促植物保钾缓解质膜去极化
  内容： 基本信息 主题：NMT发现盐胁迫下磷脂酰丝氨酸合酶可促植物保钾缓解质膜去极化 期刊：Plant & Cell Physiology 影响因子：4.062 研究使用平台：NMT植物耐盐创新平台 标题：Phosphatidylserine Synthase from Salicornia europaea Is Involved in Plant Salt Tolerance by Regulating Plasma Membrane Stability 作者：中科院植物所李银心、吕素莲、台方   检测离子/分子指标 K+   检测样品 盐角草根细胞   中文摘要（谷歌机翻） 盐诱导的脂类改变在许多植物物种中已有报道，然而，脂类生物合成和代谢如何调控，脂类在植物耐盐性中如何发挥作用的研究却少得多。在本研究中，盐角草细胞质膜（PM）中磷脂酰丝氨酸（PS）含量明显高于拟南芥。随后从盐角草中分离到一个编码磷脂酰丝氨酸合成酶（PSS）的基因，命名为SePSS。多重比对和系统发育分析表明，SePSS属于碱基交换型PSS，位于内质网。在400或800 mM NaCl胁迫下，SePSS在盐角草悬浮细胞中的失活导致PS含量降低，细胞存活率降低，PM去极化和K+外排增加。相比之下，SePSS的上调导致拟南芥PS和磷脂酰乙醇胺（PE）水平升高，耐盐性增强，同时转基因株系中活性氧积累比WT低，膜损伤较少，PM去极化较少，K+/Na+较高。这些结果表明，PS水平与植物耐盐性呈正相关，SePSS通过调节PS水平参与植物耐盐性，进而调节PM电位和通透性，维持离子稳态。本研究的工作内容为改善植物在多重胁迫下的生长提供了一个潜在的策略。   离子/分子流实验处理 0、400、800 mM NaCl处理2 h   离子/分子流实验结果 盐胁迫下，植物的PM常常会发生去极化，导致K+从细胞中渗出。为了研究SePSS在盐胁迫下调节膜电位的可能作用，分别用0、400和800 mM ...

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