烟
- 烟草根盐低温干旱
材料：烟草
基因型/品种：PBI121-GFP、PBI121-2.1GFP、PBI121-2.2GFP
检测位点：根分生区
【实验目的】前期的实验是看到了基因可以增强植物的抗逆性，现在想用NMT再验证一下
方案一：预处理—利于观察离子转运的长时效应
【盐胁迫—预处理】
检测指标：Na+、K+
Na+吸收（测Na+）目的：查看盐胁迫下，谁的根部Na+进入的少。一般来说，耐盐材料在盐胁迫下，根部吸Na+速率更小。1）对照组置于测试液中检测，记录3分钟，6重复/组2）盐胁迫组a.置于250mM盐溶液中处理0.5/1/2 h后，直接检测，记录3分钟，6重复/组
Na+外排（测Na+）目的：查看盐胁迫下，两种植物根部排Na+能力的差异。这里已经是更进一步地去发现耐盐材料的耐盐机制，是不是根部排Na+能力更强。1）对照组置于测试液中检测，记录3分钟，6重复/组2）盐胁迫组置于250mM盐溶液中处理12h后检测，记录3分钟，6重复/组
K+外排/吸收（测K+）
目的：查看盐胁迫下，植物根保K+能力，也就是哪种植物在盐胁迫下排出去的K+更少。一般来说，耐盐材料，盐胁迫下根部排K+更少
1）对照组
置于测试液中检测，记录5分钟，6重复/组
2）盐胁迫组
置于盐溶液中处理12h后，直接检测，记录3分钟，6重复/组
【干旱胁迫—预处理】
检测指标：Ca2+、H+
具体方法：10% PEG处理12h后，直接检测，记录3分钟，6重复/组
【低温胁迫—预处理】
检测指标：Ca2+
具体方法：4℃低温处理12h后，直接检测，记录3分钟，6重复/组
方案二：瞬时处理—根据经验，实时处理后，离子转运信号变化相对较强，利于观察不用处理间的差异。
【盐胁迫—瞬时处理】
检测指标：Na+、K+
具体方法
Na+250mM NaCl处理前定点检测3min，250mM NaCl处理前处理后定点检测10min，6重复/组
K+
250mM NaCl处理前定点检测3min，250mM NaCl处理前处理后定点检测10min，6重复/组
【干旱胁迫—瞬时处理】
检测指标：Ca2+、H+
具体方法：10% PEG处理前定点检测3min，10% PEG处理后定点检测10min，6重复/组
【低温胁迫—瞬时处理】
检测指标：Ca2+
具体方法：4℃低温处理前定点检测3min，4℃低温处理后定点检测10min，6重复/组
方案三
材料：烟草
基因型/品种：PBI121-GFP、PBI121-2.1GFP、PBI121-2.2GFP
三、检测位点：根分生区（过渡区中点）
【实验目的】前期的实验是看到了基因可以增强植物的抗逆性，现在想用NMT再验证一下
【盐胁迫—预处理】
检测指标：Na+、K+
具体方法：150mM NaCl处理24h后，定点检测5min，8重复/组
【干旱胁迫—实时处理】
检测指标：Ca2+、K+
具体方法：
Ca2+实时处理：15% PEG处理前检测5分钟，15% PEG处理检测10min，8重复/组
K+预处理：15% PEG处理5h后，定点检测5min，8重复/组
【低温胁迫—实时处理】
检测指标：Ca2+、K+
具体方法：
Ca2+实时处理：4℃低温处理前检测5分钟，4℃低温处理后检测10min，8重复/组
K+预处理：4℃低温处理5h后，定点检测5min，8重复/组
测试液：
盐胁迫测Na+：1mM NaCl，0.1mM CaCl2，pH6.0盐胁迫测K+：150mM NaCl，0.1mM CaCl2，0.1mM KCl，pH6.0
干旱胁迫测Ca2+、K+瞬时加药前：0.5mM CaCl2，0.5mM KCl，pH6.0瞬时加药后/预处理：15% PEG，0.5mM CaCl2，0.5mM KCl，pH6.0
低温胁迫测Ca2+、K+：0.1mM CaCl2，0.1mM KCl，pH6.0
...
- 烟草铵硝扫点定点
材料：烤烟
基因型/品种：1个对照、2个过表达株系、2个RNAi株系
检测指标：NH4+、NO3-
检测位点：根
【实验目的】分析不同氨基酸转运蛋白NtTAT（WT、OE、RNAi）NO3-和NH4+在膜上外排和内流的速率，检测氨基酸转运蛋白NtTAT是否直接影响了NO3-和NH4+氮素。
（这是第一步实验，目的是想看烟草对铵硝的偏好性，老师预期是对硝偏好性大一些）
重复：6
【具体方案】
扫点实验：对照样品选取4个重复进行扫点实验，具体检测位点
NH4+：300μm（分生区）、800μm（分生区/伸长区）、1500μm（伸长区/成熟区）、7500μm（成熟区），每个点检测3min
NO3-：800μm（分生区/伸长区）、1500μm（伸长区/成熟区）、2500μm（伸长区）、5000μm（成熟区）、7500μm（成熟区），每个点检测3min
定点实验：根据扫点实验结果，选择NH4+、NO3-吸收/差异最大的点进行定点实验，每个点检测5min
材料：烤烟
基因型/品种：1个对照、2个过表达株系、2个RNAi株系
三、检测指标：NO3-
四、检测位点：根
【实验目的2】检测WT、OE、RNAi在不同浓度NO3-（0、0.1%、0.3%）下处理下氨基酸转运蛋白NtTAT（WT、OE、RNAi）中NO3-流速，探讨过表达氨基酸转运蛋白NtTAT材料是否耐更高浓度氮素
四、重复：8
【具体方案】
不同浓度NO3-处理3天后（时间点可根据实际情况调整），定点检测5min
材料：烤烟
基因型/品种：1个对照、2个过表达株系、2个RNAi株系
三、检测指标：NO3-
四、检测位点：根
【实验目的3】分析氨基酸转运蛋白NtTAT（WT、OE、RNAi）利用不同浓度（假设两个浓度：高、低）的能量阻断剂处理下在合适的NO3浓度下（0、0.1%）氨基酸转运蛋白NtTAT是否存在依靠能量转运。
四、重复：8
【具体方案】
高、低浓度的能量阻断剂处理3天后（时间点可根据实际情况调整），定点检测5min
...