植
- 植物营养NH4+、NO3-实验体系标准
一、 材料：水稻
二、 基因型/品种：1个对照、1个过表达株系、1个RNAi株系
三、 检测指标：NH4+、NO3-
四、 检测位点：根
五、 重复：8
六、 处理
正常NH4NO3处理3d
低NH4NO3处理3d
高NH4NO3处理3d
【具体方案】
扫点实验：对照样品选取4个重复进行扫点实验，具体检测位点
300μm、800μm、1500μm、2500μm、7500μm，15000μm每个点检测3min
定点实验：根据扫点实验结果，选择NH4+、NO3-吸收最大的点进行定点实验，每个点检测5min
测试费用报价：
扫点：
1（基因型）×1（处理）×1（指标）×6（位点）×4（重复）×132元/样（定点3min）
定点：
3（基因型）×2（指标）×3（实验组）×8（重复）×195元/样（定点：5min）
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- 植物免疫Ca2+流（测叶肉细胞）实验体系标准
一、材料：水稻
二、基因型/品种：WT、mutant、OE
三、检测部位：叶肉细胞
四、检测指标：Ca2+
五、处理：
1. 无处理
2. 10 mg/mL chitin处理 24h
3. 病原菌处理24h
4. 10 mg/mL chitin瞬时处理
5. 病原菌瞬时处理
六、具体方案：
处理1、2、3：无处理、10 mg/mL chitin处理24h、病原菌处理24h后，定点检测叶肉细胞10min，8重复/组
处理4、5：10 mg/mL chitin、病原菌处理前检测5min，10 mg/mL chitin、病原菌处理后，检测10分钟（如信号在瞬时处理后10分钟内没有稳定，会延长测试时间），8重复/组
参考文献
保卫细胞：https://mp.weixin.qq.com/s/YovUAnqOYkIViXUHe0dFWw
叶肉细胞：https://mp.weixin.qq.com/s/0UZ_cqxDL_zBxQZz4ok7Pg
测试费用报价：
3（基因型）*1（测试指标）*1（测试部位：根）*1（处理方式：chitin瞬时）*8（重复数）*470
一、材料：水稻
二、基因型/品种：WT、mutant、OE
三、检测部位：叶肉细胞
四、检测指标：Ca2+
五、处理：
1. 无处理
2. 10 mg/mL chitin处理 24h
3. 病原菌处理24h
4. 10 mg/mL chitin瞬时处理
5. 病原菌瞬时处理
六、具体方案：
处理1、2、3：无处理、10 mg/mL chitin处理24h、病原菌处理24h后，定点检测叶肉细胞10min，8重复/组
处理4、5：10 mg/mL chitin、病原菌处理前检测5min，10 mg/mL chitin、病原菌处理后，检测10分钟（如信号在瞬时处理后10分钟内没有稳定，会延长测试时间），8重复/组
参考文献
保卫细胞：https://mp.weixin.qq.com/s/YovUAnqOYkIViXUHe0dFWw
叶肉细胞：https://mp.weixin.qq.com/s/0UZ_cqxDL_zBxQZz4ok7Pg
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- 植物低温Ca2+流实验体系标准
一、材料：水稻
二、基因型/品种：WT、mutant、OE
三、检测部位：叶肉细胞
四、检测指标：Ca2+
五、处理：
4℃瞬时处理
六、具体方案：
4℃处理前检测5min，4℃处理后，检测10分钟（，8重复/组
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- 植物免疫Ca2+流（测根）实验体系标准
一、材料：拟南芥
二、品种：WT、mutant
三、检测部位：根内皮层细胞
四、检测指标：Ca2+
五、处理
1 μM Flg22瞬时处理
六、具体方案：
1 μM Flg22瞬时处理前检测5分钟，1 μM Flg22瞬时处理后检测10min，8重复/组
测试液：0.1mM CaCl2, pH 6.0
平衡时间：4 h
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- 植物根、茎的固定方法
本篇以水稻幼苗根部为例，两周龄的水稻幼苗，根部呈白色，长度不超过10cm。
准备工具：塑料培养皿、滤纸、树脂块、剪刀、镊子。
具体步骤：
1. 用剪刀将滤纸剪成相同大小的长条（大小根据样品及所选取的培养皿大小来定），之后浸入盛放有测试液的培养皿中，树脂块也一并放进去，进行平衡。
2. 将样品放入测试液中平衡一段时间，具体时间根据情况而定，一般在10min-15min。
3. 用镊子把一条滤纸平放到培养皿底部，将样品放到滤纸上，再用一条滤纸盖住样品。
这里需要注意：
（1） 样品需要测定的位置要露出来，而且尽量露出的少一些，否则在测试中样品可能也会有轻微的飘动，可以用镊子轻拉样品来调节。
（2） 样品露出的位置尽量靠近培养皿中部，可以帮助工程师更好的调节电极的位置。
（3） 操作过程中尽量不要碰到需要测定的根部，以免损伤样品。
4. 为了防止加入溶液后样品飘动，可以用树脂块压住滤纸来固定住样品，需要注意的是最好不要将树脂块直接压在样品上，尤其是压在需要测试的位置上。
5. 像水稻这种整体不是很长的样品，可以将其剩余部分盘绕在培养皿中，但是不要挡住需要测定的部位，最后用滴管向培养皿中缓慢加入测试液，直接倒的话可能会把样品冲跑，测试液的量需要没过样品3-5mm，之后就可以拿来测试了。
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- 植物叶片（如：保卫细胞等）的固定方法
（一）镊子撕取法（适用于叶片较大的植物，例如烟草）
准备工具：培养皿、镊子、双面胶、剪刀、毛笔（或小刷子）等。
具体步骤：
1. 剪一小块双面胶粘在干燥的塑料培养皿底待用，面积不宜太大。
2. 用镊子撕取表皮条（下表皮）。撕取下的表皮条需要一部分透明，另一部分留有绿色叶片用于粘连固定样品。
一般情况下，只要肉眼能看见透明的表皮条，其上就会存在待测的保卫细胞，不宜太大，太大容易卷曲。
3. 将带有透明表皮条的叶片部分粘在双面胶上，透明表皮部分露在双面胶之外。为了使得表皮条跟皿之间能够紧贴，可在远离双面胶的地方滴一小滴测试液，粘之前让表皮吸附一些液体（绿色叶片部分尽量不要粘液体），靠张力将表皮条吸在皿底。
4. 用湿毛笔轻轻刷去表皮条表面的叶肉细胞。
5. 加入测试液平衡一段时间（一般为1-2小时，并加入10000～15000Lux的光照）后倒掉，由于撕取表皮的过程中会造成叶片细胞的破裂，在平衡过程中可以多更换几次测试液，以保证平衡效果。平衡结束后需要更换新鲜测试液即可测试。如果加入测试液后表皮条漂起，再用毛笔轻轻刷一下并更换新鲜的测试液。
（二）胶带粘贴撕取法（适用于叶片较小的植物，例如拟南芥）
准备工具：培养皿、深色绝缘胶带、白色透明胶带（Magic Tape）、剪刀等。
具体步骤：
1．剪取叶片将叶片上表面粘贴在深色绝缘胶带上，并使用剪刀适当修剪叶片边缘。
2．将白色透明胶带边缘剪取一个小的缺口，注意缺口的大小，过大过小都不利于获取叶片的保卫细胞。
3. 使用白色透明胶带带有缺口的地方粘贴叶片的下表皮。
4. 将白色透明胶带撕下，利用两个胶带的粘贴力可以获取叶片下表皮的保卫细胞。
5. 将撕取的样品粘贴固定到干净的培养皿中。
6. 加入测试液平衡一段时间（一般为1-2小时，并加入10000～15000Lux的光照）后倒掉，由于撕取表皮的过程中会造成叶片细胞的破裂，在平衡过程中可以多更换几次测试液，以保证平衡效果。平衡结束后需要更换新鲜测试液即可测试。
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- 植物种子与类似形状样品的固定方法
● 可以使用此类方法的样品实际上有很多种，例如动植物的细胞、愈伤组织、液泡，单细胞藻类、细菌、酵母菌，再或是花粉粒、花粉管等，固定时整体上遵循一个原则：不管样品是贴壁还是悬浮，需要保证样品在测试过程中不会随意飘动或游动。
本篇以豌豆根部边缘细胞为例。
准备工具：塑料培养皿，旭月公司提供的固定样品玻片，移液枪及枪头，镊子，测试液等。
具体步骤：
1. 取一个干净的培养皿，用移液枪在皿底中间位置滴一滴测试液，然后用镊子夹住一片玻片轻轻压在培养皿底部，防止之后大量加入测试液后玻片漂起来。
2. 用移液枪吸取一定量的样品溶液（具体量依样品而定，一般为100uL-200uL），滴到玻片中间位置，涂抹均匀，然后静置5-10min，使样品能充分被玻片吸附住。
3. 用移液枪吸取一定量测试液，先用镊子轻轻压住玻片边缘，再沿着培养皿边缘缓慢加入测试液，防止玻片漂起来，加入的测试液必须完全没过玻片。
4. 同样沿培养皿边缘用移液枪（或滴管）将皿中测试液吸出（将漂浮的细胞冲掉），然后再加入新鲜的测试液就可以进行测试了。
注意以下事项：
1. 尽量将样品在玻片上涂抹开，让样品充分接触到玻片，这样才能起到作用。
2. 加溶液时，一定要用镊子按住玻片边缘。因为加溶液时很容易将玻片冲起来，在溶液的影响下使得样品被冲到玻片下方，无法测试。所以不仅要按住玻片边缘，更要缓缓加入溶液。
3. 吸取溶液时同样要缓缓的，并且不要伸到液面最低端吸取，这样容易将样品吸走。
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