拟
- 拟南芥根真菌滤液
材料：拟南芥
处理：
纯化真菌滤液1
纯化真菌滤液2
纯化真菌滤液3
检测指标：H+
检测部位：根分生区（过渡区中点）
具体方案：
纯化真菌滤液1、2、3处理拟南芥根24h后（处理时间可调整），定点检测10分钟
纯化真菌滤液1、2、3处理前检测5分钟，纯化真菌滤液1、2、3实时处理后检测10分钟
七、重复数：8
...
- 拟南芥根PEG
材料：拟南芥
基因型：WT、OE1、OE2、RNAi
检测部位：根分生区（过渡区中点）
检测指标：Ca2+、Na+、K+、Cl-
处理：
150mM NaCl
145mM NaCl+5mM Na2CO3
10%PEG6000
具体方案：
Ca2+预处理150mM NaCl、145 mM NaCl+5mM Na2CO3、10%PEG处理6h后（处理时间可调整），定点检测10分钟在，8重复/组
Ca2+实时处理150mM NaCl、145mM NaCl+5mM Na2CO3、10%PEG处理前检测5分钟，150mM NaCl、145mM NaCl+5mM Na2CO3、10%PEG处理10min后检测15-20分钟（经费允许可以持续检测30分钟），8重复/组
Na+吸收（测Na+）【目的：查看盐碱胁迫下，谁的Na+进入的少】一般来说，耐盐碱材料在盐胁迫下，吸Na+速率更小。1）对照组置于测试液中检测，记录10分钟，8重复/组2）胁迫组a.置于150mM NaCl、145 mM NaCl+5mM Na2CO3中处理0.5/1/2h后，直接检测，记录10分钟，8重复/组
Na+外排（测Na+）【目的：查看盐碱胁迫下，两种植物排Na+能力的差异】这里已经是更进一步地去发现耐盐碱材料的耐受机制，是不是根部排Na+能力更强1）对照组置于测试液中检测，记录10分钟，8重复/组2）胁迫组置于150mM NaCl、145 mM NaCl+5mM Na2CO3中处理6/12/24/48h后（时间点可以调整），记录10分钟，8重复/组
K+吸收/外排（测K+）
【目的：查看盐碱胁迫下，植物保K+能力，也就是哪种植物在盐碱胁迫下排出去的K+更少】
一般来说，耐盐碱材料，胁迫下排K+更少
1）对照组
置于测试液中检测，记录10分钟，8重复/组
2）胁迫组
150mM NaCl、145 mM NaCl+5mM ...
- 拟南芥根NaHCO3处理
实验1—Ca2+、H+、K+流速
检测样品：拟南芥
检测部位：根部伸长区—老师写的是成熟区（距离根冠1000 μm以上）
检测样品品种：WT、HA12#17、HA12#58、HA16#3、HA16#4、HA24#13、HA24#14
处理方式：无处理（对照）、7 mM 的NaHCO3处理24 h-48h（时间点不确定，暂定24和48h）
重复数：8
检测指标：Na+、H+、K+
具体方案
对照组、7mM NaHCO3胁迫24h、48h后定点检测5 min
目的：观察NaHCO3长时处理效应，比较植物耐碱胁迫的能力
参考文献
https://mp.weixin.qq.com/s/jgVHMzXIJp8mEvsuT6Ny3w
https://mp.weixin.qq.com/s/hoDMtVPbC0jxqVZnvs7kRA
...
- 拟南芥保卫细胞瞬时ABA
材料：拟南芥
基因型：WT、突变体
检测部位：保卫细胞
检测指标：Ca2+
处理：10μM ABA实时处理
具体方案：
WT：10μM ABA处理前检测5min，10μM ABA处理后检测20min（3个重复，用于确定信号变化比较大的时间段）
10μM ABA处理前检测5min，10μM ABA处理后检测10min（5个重复，假如根据上面的三个重复确定数据在加药后10min可以稳定，则之后的样品都检测10min）
突变体：10μM ABA处理前检测5min，10μM ABA处理后检测10min（8重复）
...
- 拟南芥根 叶酸+硝酸钾处理 NO3-
方案一
材料：拟南芥
品种：WT、atdfb-3
处理：
9.4mM KNO3处理1d、3d、6d
9.4mM KNO3 +叶酸处理1d、3d、6d（仅处理atdfb-3突变体）
检测指标：NO3-
检测部位：根成熟区
具体方案：
处理1d、3d、6d后，检测10分钟稳定数据
七、重复数：6
方案二
材料：拟南芥
品种：WT、atdfb-3
处理：
9.4mM KNO3处理6d
9.4mM KNO3 +叶酸实时处理（仅处理atdfb-3突变体）
检测指标：NO3-
检测部位：根成熟区
具体方案：
9.4mM KNO3处理6d后，检测10分钟稳定数据，8重复/组
9.4mM KNO3 +叶酸实时处理前检测5分钟，9.4mM KNO3 +叶酸实时处理后持续检测20分钟（摸索最佳处理时间），4重复/组
测试液
9.4mM KNO3，0.1mM CaCl2，pH6.0
叶酸，9.4mM KNO3，0.1mM CaCl2，pH6.0
2021.9.9
材料：拟南芥
品种：WT、atdfb-3
处理：
9.4mM KNO3处理6d
9.4mM KNO3+50μM叶酸处理6d
检测指标：NO3-
检测部位：根成熟区
具体方案：
处理6d后，检测10分钟稳定数据
七、重复数：6
...
- 拟南芥根盐胁迫
材料：拟南芥
基因型：转基因1、转基因2、转基因3、转基因4、突变体1
重复数：6
二、处理：
NaCl处理24h
三、检测指标：Na+
四、检测位点：根分生区（过渡区）
五、具体实验细节：
NaCl处理24h后，定点检测5分钟稳定数据
【目的：查看盐胁迫下，不同植物根部排Na+能力差异】
...
- 拟南芥根盐胁迫
周四早上：
先进行周五早上盐胁迫苗子的处理（需要NaCl胁迫24小时）
周五：
上午对前一天NaCl处理的苗子进行测试
实验1、基因A对盐胁迫介导的跨膜离子流动的影响，共12个样品
检测样品：拟南芥
检测部位：根
检测样品品种：A和B（*2）
检测指标：Na+外排
处理方式：正常培养5~6天后，100mM NaCl处理24h后，放入测试液。
检测位点：扫点：根毛区、分生区、伸长区（*3），优先测根毛区。
测定时间：对照组：检测3分钟（三个区域测同一棵苗，进行扫点）盐胁迫组：测5分钟（三个区域测同一棵苗，进行扫点）
重复数：3（*3）
处理液：NaCl（100mM），pH5.8测试液：NaCl（0.5mM），pH5.8
实验2、基因A对冷胁迫介导的跨膜离子流动的影响，共12个样品
检测样品：拟南芥
检测部位：根
检测样品品种：A和B（*2）
检测指标：Ca2+
处理方式：正常培养后冷胁迫瞬时处理
检测位点：分生区、伸长区（*2），优先测分生区。
测定时间：处理前：检测3分钟4℃处理瞬时处理后：检测10分钟（处理前处理后测同一棵苗）
重复数：3（*3）
测试液：0.5 mM CaCl2，pH5.8低温测试液：0.5 mM CaCl2，pH5.8
...
- 拟南芥根Na、K盐胁迫
材料：拟南芥
基因型：WT、转基因1、转基因2
处理：200mM NaCl处理24h
检测指标：Na+，K+
检测部位：根分生区（过渡区中间）
具体方案：
Na+吸收（测Na+）【目的：查看盐胁迫下，谁的Na+进入的少】一般来说，耐盐材料在盐胁迫下，吸Na+速率更小。1）对照组置于测试液中检测，记录10分钟，8重复/组2）盐胁迫组a.置于200mM NaCl中处理0.5/1/2 h后，直接检测，记录10分钟，8重复/组
Na+外排（测Na+）【目的：查看盐胁迫下，两种植物排Na+能力的差异】这里已经是更进一步地去发现耐盐材料的耐盐机制，是不是根部排Na+能力更强1）对照组置于测试液中检测，记录10分钟，8重复/组2）盐胁迫组置于200mM NaCl中处理24h后，记录10分钟，8重复/组
K+吸收/外排（测K+）
【目的：查看盐胁迫下，植物保K+能力，也就是哪种植物在盐胁迫下排出去的K+更少】
一般来说，耐盐材料，盐胁迫下排K+更少
1）对照组
置于测试液中检测，记录10分钟，8重复/组
2）盐胁迫组
200mM NaCl胁迫后，立即检测（200mM NaCl实时处理）
b.置于200mM NaCl中处理24h后，直接检测，记录10分钟，8重复/组（200mM NaCl预处理24h）
...
- 拟南芥根Ca TM和DMSO预处理 瞬时实验
【实验一：实时处理】
材料：6日龄拟南芥
基因型：WT、突变体
三、检测指标：Ca2+
四、检测位点：根分生区（过渡区）
五、重复：8
【具体方案】
对照组：5 mg/L DMSO 处理前检测5min，5 mg/L DMSO实时处理后检测10 min
处理组：5 mg/L TM处理前检测5min，5 mg/L TM实时处理后检测10 min
备注：对照组、处理组能否只检测一组药品处理前的样品
【实验二：预处理】
材料：6日龄拟南芥
基因型：WT、突变体
三、检测指标：Ca2+
四、检测位点：根分生区（过渡区）
五、重复：8
【具体方案】
TM处理0h（对照）、3h、6h后定点检测5min
...
- 拟南芥保卫细胞K、Cl免疫
检测样品：拟南芥
检测部位：保卫细胞
检测样品品种：WT
检测指标： K+、Cl-
处理方式：
flg22（100 nM）实时处理
ABA（10 uM）实时处理
flg22+SCREW实时处理
ABA+SCREW实时处理
检测位点：保卫细胞定点检测
测定时间：a、b、c、d组加药前检测3min，加药后检测10min（根据前两个样品数据的稳定情况决定后续样品的检测时间）
重复数：6
...
- 拟南芥保卫细胞ACC瞬时处理
材料：拟南芥
基因型：野生型、突变体、过表达
处理：50μM ACC处理10min
检测指标：H2O2
检测位点：保卫细胞
重复：3
具体实验内容
50μM ACC处理前检测10min，50μM ACC处理10min后再检测10min
...
- 拟南芥下表皮保卫细胞
检测样品是：拟南芥；检测部位是：拟南芥下表皮保卫细胞
品种：fim1-1、fim1-2、fim2-2
检测指标：H2O2
处理方式：50 μM ABA处理时间为15min
检测位点：
定点测量拟南芥下表皮保卫细胞没有处理的样品检测10min，50 μM ABA处理15min后检测10min
重复数：3
测试液
处理前：2.0mM KCl, 0.1 mM CaCl2, 5.0 mM MES, pH 6.0；
处理后：50 μM ABA, 2.0mM KCl, 0.1 mM CaCl2, 5.0 mM MES, pH ...