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山定子砧木根不同基因型H
材料：山定子砧木基因型：WT1、WT2、WT3、WT4、OE1、OE2、OE3、OE4 检测部位：根分生区检测指标：H+ 具体方案：定点检测5min，8重复/组 ...
山师EEB：囊泡运输相关蛋白LbSYP61参与二色补血草泌盐 | NMT植物耐盐创新平台
基本信息主题：囊泡运输相关蛋白LbSYP61参与二色补血草泌盐期刊：Environmental and Experimental Botany 研究使用平台：NMT植物耐盐创新平台标题：The SNARE protein LbSYP61 participates in salt secretion in Limonium bicolor 作者：山东师范大学戎均康、王宝山、陈敏、Chaoxia Lu 检测离子/分子指标 Na+ 检测样品二色补血草第六个叶片中文摘要（谷歌机翻）土壤盐渍化是一个全球性问题，抑制了植物的生长并限制了作物的产量。盐生植物通过盐腺分泌过量的盐，从而避免了盐在其细胞内的过度积累，并保护了自己免受盐相关损害的伤害。但是，尚不清楚通过盐腺分泌盐的分子机制。在这里，我们使用布雷菲德菌素A（BFA），一种高尔基体介导的细胞分泌的特异性抑制剂，通过叶盘法和非侵入式测微法检测双色网状嗜盐菌柠檬酸中囊泡运输是否参与盐的分泌。实际上，在200μg/ ml ...
山农：NMT发现盐胁迫下过表达VviHKT1;7促葡萄根排Na+保K+ 为其可提高植物耐盐能力提供证据
基本信息主题：NMT发现盐胁迫下过表达VviHKT1;7促葡萄根排Na+保K+ 为其可提高植物耐盐能力提供证据期刊：中国农业科学研究使用平台：NMT植物耐盐创新平台标题：葡萄钾离子转运基因VviHKT1;7在盐胁迫下的功能鉴定作者：山东农业大学杜远鹏、刘闯检测离子/分子指标 Na+、K+ 检测样品葡萄根，距根尖600 μm根表上的点中文摘要【目的】探讨VviHKT1;7在葡萄抗盐机制中的作用，为后续培育抗盐品种提供理论参考。【方法】利用DANMAN和MEGA软件对葡萄HKT进行生物学信息分析。以抗盐性较强的砧木SA15和SA17以及生产上常用砧木1103P组培苗为材料，用100 mmol·L-1 NaCl分别处理0、3、6、12、24和48 h，以清水处理相应时间为对照，荧光定量PCR（qRT-PCR）检测HKT1在葡萄根部的相对表达量；以SA17的cDNA为模板克隆基因，连接表达载体pRI101-AN-GFP，利用农杆菌侵染法侵染拟南芥花序，在抗性MS板上筛选直到获得T3纯合株系；将野生型与转基因拟南芥种子播种于MS板和含有150 mmol·L-1 NaCl的MS板上，观察其发芽和生长情况并统计根长及鲜重；利用发根农杆菌技术获得SA17 转基因葡萄根系，100 mmol·L-1 NaCl处理24 h后，利用基于非损伤微测技术（NMT）活体生理检测仪检测野生型和转基因葡萄根系Na+的净流速以及盐胁迫下K+瞬时流速。【结果】多序列比对和系统进化树分析表明，葡萄HKT之间同源性较高，其中VviHKT1;7开放阅读框序列长度为1380bp，与VviHKT1;6的亲缘关系最近。盐胁迫显著诱导了葡萄HKT1在3个品种中的表达，其中VviHKT1;7的相对表达量上调较高，长时间胁迫后表达量仍有上升趋势，胁迫6或12 h时表达量达到峰值，且在耐盐性强的SA17、SA15中表达量明显高于1103P。拟南芥的发芽与生长结果表明，正常情况下野生型和转基因拟南芥的发芽和生长情况无显著差异，但盐胁迫下转基因拟南芥的发芽率、根长、鲜重明显高于野生型。荧光检测结果表明，转基因葡萄根系在荧光下可以明显看到绿色荧光，而野生型根系检测不到荧光；进一步qRT-PCR检测结果表明，转基因葡萄根系中VviHKT1;7的表达量是野生型根系的20多倍。离子流速检测结果表明，正常情况下野生型和转基因根系Na+净流速显示出外排，各个时间段的波动幅度较小且无显著差异，平均净流速分别为208和205 pmol·cm-2·s-1；盐胁迫后，两者Na+净流速明显增大，各个时间段的波动幅度增大，平均净流速分别为1053和1340pmol·cm-2·s-1。正常情况下两种根系K+吸收与外排处于动态平衡状态，盐胁迫显著诱导K+外排，转基因根系的外排速率明显小于野生型，分别为406和952 pmol·cm-2·s-1，表明转基因植株根系的Na+外排、K+保持能力明显大于野生型。【结论】VviHKT1;7在葡萄响应盐胁迫中发挥着重要作用，过表达该基因可以提高拟南芥和葡萄根系在盐胁迫下的适应能力。离子/分子流实验处理方法 ①0、100 mmol·L-1 NaCl 胁迫24 h（测Na+） ②100 mmol·L-1 NaCl实时处理（测K+）离子/分子流实验结果正常情况下，野生型和转基因葡萄根系Na+外排较低，约200 pmol·cm-2·s-1；100mmol·L-1 NaCl处理24 h后，Na+外排的净流速明显增大，转基因根系外排能力明显大于野生型（图1B）。如图1C所示，在15 min测量过程中，正常条件下根系Na+平均净流速无明显差异，盐胁迫后转基因根系平均净流速明显高于野生型，进一步说明转基因根系可以更有效地调控Na+外排。图1. Na+净流速的检测。正值代表Na+外排。如图2所示，在加入NaCl 前，野生型和转基因根系K+流呈现吸收与外排的动态平衡中，且流速相对比较平稳。当施加100 mmol·L-1 NaCl后，迅速增加了葡萄根系K+的外排，但转基因根系的增加幅度明显小于野生型。图2. 野生型和转基因葡萄根系的K+净流速的检测。正值代表K+外排。其他实验结果对葡萄HKT家族蛋白序列进行比对发现，6个葡萄HKT蛋白相似度为60.25%，并且都含有HKT蛋白家族特有的结构功能域TrkH。将葡萄HKT蛋白序列与其他物种蛋白序列构建系统进化树，发现VviHKT1;7、VviHKT1;6和VviHKT1;8的亲缘关系较近；VviHKT1;1和VviHKT1;3亲缘关系最近；而VviHKT1;2则与大豆中的GmHKT1亲缘关系最近。 NaCl胁迫下所有HKT在SA17、SA15、1103P根系中的表达量升高。胁迫12 h后，VviHKT1;1、VviHKT1;2、VviHKT1;3、VviHKT1;6、VviHKT1;8的表达量普遍下降，而VviHKT1;7的表达量呈现下降后上升的趋势。 TaWRKY70增加了酵母的Cd富集能力。 Western blot分析表明，TaWRKY70在只转基因植株中表达；在Cd处理下，WT株系的发芽率、初生根长、生物量小于TaWRKY70转基因植株；这些结果表明，TaWRKY70参与了拟南芥对Cd胁迫的响应，增强了拟南芥对Cd的耐受性。盐胁迫抑制了种子的发芽，且对野生型种子抑制更明显。转基因拟南芥在盐胁迫下的生长状况明显好于野生型。转基因根系目的基因的表达量显著高于野生型。结论盐胁迫显著诱导葡萄HKT家族成员表达量上调，其中VviHKT1;7上调最显著；异源过表达VviHKT1;7可以提高拟南芥在盐胁迫下的适应能力，同源过表达该基因可以提高葡萄根系在盐胁迫下的Na+排出和K+保持能力。测试液 0.1 mM ...
山农生科院：NMT发现Cd胁迫下过表达TaPUB1促根排Cd2+ 为TaPUB1与TaIRT1互作并泛素化抑制小麦吸Cd提供证据
基本信息主题：NMT发现Cd胁迫下过表达TaPUB1促根排Cd2+ 为TaPUB1与TaIRT1互作并泛素化抑制小麦吸Cd提供证据期刊：Journal of Agriculture and Food Chemistry 影响因子：5.279 研究使用平台：NMT重金属胁迫创新平台标题：Wheat TaPUB1 Regulates Cd Uptake and Tolerance by Promoting the Degradation of TaIRT1 and TaIAA17 作者：山东农业大学张广强、王玮检测离子/分子指标 Cd2+ 检测样品小麦根中文摘要镉（Cd）在农业土壤中的积累是一个日益严重的问题，因为植物吸收了Cd，抑制了其生长发育。然而，小麦体内镉解毒和积累的分子机制尚不清楚。本研究从小麦中分离到了U-box E3连接酶TaPUB1，并报道了TaPUB1在小麦镉吸收和耐受中的功能特性。在Cd胁迫下，TaPUB1过表达株系的光合速率高于野生型；TaPUB1-RNAi株系的结果相反。此外，TaPUB1过表达株系降低了Cd的吸收和积累，而RNAi植株在Cd处理后Cd积累量显著增加。研究进一步发现，TaPUB1通过三种途径增强了小麦对Cd胁迫的抗性。首先，TaPUB1与TaIRT1相互作用并泛素化，从而抑制Cd的吸收。第二，TaPUB1直接与TaIAA17相互作用并泛素化，促进其降解，通过激活Cd胁迫下的Aux信号通路而导致主根伸长。此外，TaPUB1通过调控Cd胁迫下抗氧化相关基因的表达和抗氧化酶活性来减少ROS的积累。从而揭示了TaPUB1通过调节TaIRT1和TaIAA17蛋白的稳定性来调控Cd吸收和耐受的分子机制。离子/分子流实验处理方法 100 μM CdCl2、50 μM MG132（一种特异性的26S蛋白酶体抑制剂）、100 ...