材料：烤烟

基因型/品种：1个对照、2个过表达株系、2个RNAi株系

检测指标：NH4+、NO3-

检测位点：根

【实验目的】分析不同氨基酸转运蛋白NtTAT（WT、OE、RNAi）NO3-和NH4+在膜上外排和内流的速率，检测氨基酸转运蛋白NtTAT是否直接影响了NO3-和NH4+氮素。

（这是第一步实验，目的是想看烟草对铵硝的偏好性，老师预期是对硝偏好性大一些）

重复：6

【具体方案】

1. 扫点实验：对照样品选取4个重复进行扫点实验，具体检测位点
   1. NH4+：300μm（分生区）、800μm（分生区/伸长区）、1500μm（伸长区/成熟区）、7500μm（成熟区），每个点检测3min
   2. NO3-：800μm（分生区/伸长区）、1500μm（伸长区/成熟区）、2500μm（伸长区）、5000μm（成熟区）、7500μm（成熟区），每个点检测3min
2. 定点实验：根据扫点实验结果，选择NH4+、NO3-吸收/差异最大的点进行定点实验，每个点检测5min

 

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1. 材料：烤烟
2. 基因型/品种：1个对照、2个过表达株系、2个RNAi株系

三、检测指标：NO3-

四、检测位点：根

【实验目的2】检测WT、OE、RNAi在不同浓度NO3-（0、0.1%、0.3%）下处理下氨基酸转运蛋白NtTAT（WT、OE、RNAi）中NO3-流速，探讨过表达氨基酸转运蛋白NtTAT材料是否耐更高浓度氮素

四、重复：8

【具体方案】

1. 不同浓度NO3-处理3天后（时间点可根据实际情况调整），定点检测5min

 

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1. 材料：烤烟
2. 基因型/品种：1个对照、2个过表达株系、2个RNAi株系

三、检测指标：NO3-

四、检测位点：根

【实验目的3】分析氨基酸转运蛋白NtTAT（WT、OE、RNAi）利用不同浓度（假设两个浓度：高、低）的能量阻断剂处理下在合适的NO3­浓度下（0、0.1%）氨基酸转运蛋白NtTAT是否存在依靠能量转运。

四、重复：8

【具体方案】

1. 高、低浓度的能量阻断剂处理3天后（时间点可根据实际情况调整），定点检测5min

标签: NH4+, NO3-, 扫点定点, 烟草, 铵硝