材料：烟草

基因型/品种：PBI121-GFP、PBI121-2.1GFP、PBI121-2.2GFP

检测位点：根分生区

 

【实验目的】前期的实验是看到了基因可以增强植物的抗逆性，现在想用NMT再验证一下

方案一：预处理—利于观察离子转运的长时效应

【盐胁迫—预处理】

1. 检测指标：Na+、K+
2. Na+吸收（测Na+）
   目的：查看盐胁迫下，谁的根部Na+进入的少。一般来说，耐盐材料在盐胁迫下，根部吸Na+速率更小。
   1）对照组
   置于测试液中检测，记录3分钟，6重复/组
   2）盐胁迫组
   a.置于250mM盐溶液中处理0.5/1/2 h后，直接检测，记录3分钟，6重复/组
3. Na+外排（测Na+）
   目的：查看盐胁迫下，两种植物根部排Na+能力的差异。这里已经是更进一步地去发现耐盐材料的耐盐机制，是不是根部排Na+能力更强。
   1）对照组
   置于测试液中检测，记录3分钟，6重复/组
   2）盐胁迫组
   置于250mM盐溶液中处理12h后检测，记录3分钟，6重复/组
4. K+外排/吸收（测K+）

目的：查看盐胁迫下，植物根保K+能力，也就是哪种植物在盐胁迫下排出去的K+更少。一般来说，耐盐材料，盐胁迫下根部排K+更少

1）对照组

置于测试液中检测，记录5分钟，6重复/组

2）盐胁迫组

置于盐溶液中处理12h后，直接检测，记录3分钟，6重复/组

【干旱胁迫—预处理】

1. 检测指标：Ca2+、H+
2. 具体方法：10% PEG处理12h后，直接检测，记录3分钟，6重复/组

【低温胁迫—预处理】

1. 检测指标：Ca2+
2. 具体方法：4℃低温处理12h后，直接检测，记录3分钟，6重复/组

方案二：瞬时处理—根据经验，实时处理后，离子转运信号变化相对较强，利于观察不用处理间的差异。

【盐胁迫—瞬时处理】

1. 检测指标：Na+、K+
2. 具体方法

1. Na+
   250mM NaCl处理前定点检测3min，250mM NaCl处理前处理后定点检测10min，6重复/组
2. K+

250mM NaCl处理前定点检测3min，250mM NaCl处理前处理后定点检测10min，6重复/组

【干旱胁迫—瞬时处理】

1. 检测指标：Ca2+、H+
2. 具体方法：10% PEG处理前定点检测3min，10% PEG处理后定点检测10min，6重复/组

【低温胁迫—瞬时处理】

1. 检测指标：Ca2+
2. 具体方法：4℃低温处理前定点检测3min，4℃低温处理后定点检测10min，6重复/组

 

方案三

1. 材料：烟草
2. 基因型/品种：PBI121-GFP、PBI121-2.1GFP、PBI121-2.2GFP

三、检测位点：根分生区（过渡区中点）

【实验目的】前期的实验是看到了基因可以增强植物的抗逆性，现在想用NMT再验证一下

【盐胁迫—预处理】

1. 检测指标：Na+、K+
2. 具体方法：150mM NaCl处理24h后，定点检测5min，8重复/组

【干旱胁迫—实时处理】

1. 检测指标：Ca2+、K+
2. 具体方法：

1. Ca2+实时处理：15% PEG处理前检测5分钟，15% PEG处理检测10min，8重复/组
2. K+预处理：15% PEG处理5h后，定点检测5min，8重复/组

【低温胁迫—实时处理】

1. 检测指标：Ca2+、K+
2. 具体方法：

1. Ca2+实时处理：4℃低温处理前检测5分钟，4℃低温处理后检测10min，8重复/组
2. K+预处理：4℃低温处理5h后，定点检测5min，8重复/组

测试液：

1. 盐胁迫测Na+：1mM NaCl，0.1mM CaCl2，pH6.0
   盐胁迫测K+：150mM NaCl，0.1mM CaCl2，0.1mM KCl，pH6.0
2. 干旱胁迫测Ca2+、K+
   瞬时加药前：0.5mM CaCl2，0.5mM KCl，pH6.0
   瞬时加药后/预处理：15% PEG，0.5mM CaCl2，0.5mM KCl，pH6.0
3. 低温胁迫测Ca2+、K+：0.1mM CaCl2，0.1mM KCl，pH6.0

标签: Ca2+, H+, K+, Na+, 低温, 干旱, 烟草, 烟草根, 盐